tgfβ在慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞中的表达及其保护机制的分析眼科学专业论文.docxVIP

·中文论著摘要·TGF--pl在慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞中的表 ·中文论著摘要· TGF--pl在慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞中的表 达及其保护机制的研究 目 的 青光眼是严重损害视力的常见致盲眼病，青光眼患者视功能的损害是视神经 纤维损伤并导致视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的结果。研究认为，逆行运输阻 滞、多种营养因子缺乏、缺血以及兴奋性氨基酸的毒性作用等可能是引发凋亡的 因素。因此，治疗青光眼的最终目的是预防视神经的损害和RGCs的凋亡。 目前视神经保护的方法有：(一)改善视乳头微循环，(二)谷氨酸受体拮抗 剂的应用，(三)一氧化氮途径抑制剂，(四)提供神经营养因子，(五)抗凋亡治 疗，(六)热休克蛋白应用，(七)促红细胞生成素，等。 转化生长因子TGF．B是近年来发现的一个重要的生长因子家族，哺乳动物中 TGF．131含量最高。TGF．B1生物学作用广泛，在胚胎形成、细胞生长、分化、血 管形成、肿瘤增殖、伤口愈合、炎症反应及免疫调节等方面都有重要作用。在神 经系统中，TGF．[31还具有抑制神经元凋亡，促进神经元轴突生长，促进神经元存 活和分化等作用。TGF．131与其它神经营养因子相互作用可以促进神经元存活。在 脑损伤性疾病中，TGF．131还有充当神经保护剂、抑制细胞凋亡的作用，脑组织缺 氧缺血性损伤后，细胞凋亡增加，Bcl．2／Bax比值下降，TGF．131干预后可调控Bcl-2 及Bax蛋白表达，使Bcl．2／Bax比值升高，TGF．IBl可以通过增加抗凋亡蛋白Bcl一2 表达，起神经细胞保护作用。目前，已知此保护作用的途径包括降低Ca2+浓度， 稳定细胞内钙及增加Bcl．2相关死亡因子Bad磷酸化，减少Bad蛋白表达。 Bel．2基因家族成员是细胞凋亡途径中的重要调节因子，Bcl．2和Bax调控细胞 凋亡，Bcl．2抑制凋亡，Bax促进凋亡。近年研究提示，细胞凋亡不仅取决于Bcl-2 和Bax自身表达的高低，还与Bcl．2／Bax的比值有关，细胞内Bcl．2和Bax的比值是决 定细胞凋亡与否的一个很敏感的指标，Bcl．2与Bax的比值决定着细胞受诱导刺激 后是凋亡还是存活，比值增加，细胞趋于存活，比值下降，细胞趋于凋亡。研究 后是凋亡还是存活，比值增加，细胞趋于存活，比值下降，细胞趋于凋亡。研究 表明，急性高眼压大鼠随着视网膜神经节细胞的凋亡，Bcl．2／Bax下降。目前研究 也明确显示，Bcl．2的表达能够阻止或减少视网膜视神经节细胞的凋亡。 Smad蛋白家族是目前发现的TGF．131唯一的底物，是把TGF一131受体信号从 胞质传导到细胞核内的中介分子。TGF．131多种功能的发挥均依赖Smad蛋白的信 号转导及调控。Smad4在TGF．B1．Smad信号转导中处于中枢环节，能与活化的受 体Smads形成多元复合体，通过特定的穿梭机制进入细胞核中与转录激活或转录 抑制因子相互作用，进而调节靶基因的表达。 NF．r,B又称核转录因子，是一种广泛存在于体内各种细胞的核转导因子。作 为一种多向性调节蛋白，NF．r．B可以介导细胞存活信号，防止细胞凋亡。各种研 究表明，细胞抗凋亡作用的启动信号仍然是各种生存因子通过受体激酶的介导， 激发以NF．r,B为中心的正向级放大的信号转导通路，促使NF．rd3调控的抗凋亡基 因如Bcl-2家族成员等的激活及Caspase．9等的凋亡。 目前，国内外尚未有TGF．131在慢性高眼压大鼠RGCs中的表达以及TGF一131 在青光眼中的抗凋亡作用的研究。为了探讨TGF．p1在青光眼中的表达及其抗凋 亡作用途径，本课题应用TGF．131抗体、TGF．131抗原分别干预慢性高眼压大鼠， 检测视网膜神经节细胞TGF．[31、Bcl．2和Bax的表达，以及检测TGF．131信号转 导途径中Smad4和NF．r,B的表达，以期证实TGF．131在青光眼视网膜神经节细胞 中的抗凋亡作用，为青光眼的治疗提供一定依据。 研究方法 一、TGF．pl在慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞的表达及其抗 凋亡作用 采用免疫组化和RealTime PCR法检测正常组、普通高眼压组、TGF．131抗体 干预高眼压组大鼠RGCs中TGF．p1的表达。采用TUNEL法检测普通高眼压组和 TGF．Bl抗体干预高眼压组中RGCs凋亡并计数。 二、TGF．p1对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞Bel．2和Bax 表达的影响 2 采用免疫组化和RealTime 采用免疫组化和RealTime PCR法检测正常组、普通高眼压组、TGF．p1抗原 干预高眼压组中不同时间段大鼠视网膜神经节细胞Bcl．2和Bax的表达，计算 Bcl．2／bax比值，并用TUNEL法检测普通高眼压组和TOF．81抗原干预高眼压组 RGCs凋