变温处理对叶片中柑橘碎叶病毒含量影响和脱毒效应研究植物病理学专业论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 目录 目录 目录 摘要 。I Abstract ．．． ． ．． ．I 第一章文献综述 ．1 1．1发生与分布 l 1．2症状 ．1 1．3寄主范围和传播途径 2 1．4病原、分类地位及分子生物学特性 2 1．5检测方法 4 1．5．1生物学检测 4 1．5．2血清学检测 4 1．5．3 PCR检测 。4 1．6脱除技术 6 第二章引言 ～9 第三章不同恒温对甜橙老叶中CTLV含量的影响 一11 3．1材料与方法 ．11 3．1．1供试材料 ．1l 3．1．2主要仪器 一11 3．1．3主要试剂 一11 3．2实验方法 ．．12 3．2．1实验设计 ．．12 3．2．2总核酸的提取 一12 3．2．3引物的合成 13 3．2．4 eDNA合成 13 3．2．5普通RT．PCR检测 。14 3．2．6 PCR产物电泳 14 3-2．7实时定量RT—PCR 14 3．3结果与分析 ．15 3．3．1供试甜橙植株准备 ．．15 3．3．2不同恒温处理条件下甜橙老叶中CTLV分布 ．．15 3．4结论与讨论 ．17 第四章恒温处理对甜橙嫩芽上CTLV分布的影响 ．．19 万方数据 万方数据 万方数据 西南大学硕士论文4．1材料与方法 西南大学硕士论文 4．1材料与方法 ．19 4．1．1供试材料 ～19 4．1．2主要仪器 ．．19 4．1．3主要试剂 ．．19 4．2实验方法 ．19 4．2．1实验设计 ．．19 4．2．2茎尖嫁接 20 4．2．3总核酸的提取 ．．20 4．2．4引物的合成 一21 4．2．5 eDNA合成 ．．21 4．2．6实时定量RT．PCR 21 4．3结果与分析 ．21 4．3．1不同温度处理下植株嫩芽叶片中CTLV含量变化 ．．21 4．3．2茎尖嫁接苗 ．26 4．4结论与讨论 ．27 第五章变温处理对甜橙植株嫩芽CTLV的影响和脱毒效应研究 ．．29 5．1材料与方法 ．29 5．1．1供试材料 ．．29 5．1-2主要仪器 ．．29 5．1．3主要试剂 一29 5．2实验方法 ．29 5．2．1实验设计 ．．29 5．2．2茎尖嫁接 一30 5．2．3总核酸的提取 一30 5．2．4引物的合成 30 5．2．5 eDNA合成 ．．30 5．2．5实时定量RT．PCR ．30 5．3结果与分析 ．30 5．3．1变温处理甜橙老叶中CTLV分布变化 ．．30 5．3．2变温处理甜橙嫩芽中CTLV分布情况 ．．31 5-3’3变温处理甜橙植株存活茎尖苗带毒情况 ．．37 5．4结论与讨论 ．38 第六章主要结论、创新点和展望 一41 Ⅱ 万方数据 万方数据 目录参考文献 目录 参考文献 43 攻读硕士学位期间发表论文及参加科研项目 ．5l 致谢 ．．53 IIl 西南大学硕士论文 IV 摘要变温处理对叶片中柑橘碎叶病毒含量影响和 摘要 变温处理对叶片中柑橘碎叶病毒含量影响和 脱毒效应研究 植物病理学专业 贾 敏硕士研究生 指导教师 李中安研究员杨方云副研究员 摘要 柑橘碎叶病是由柑橘碎叶病毒(Citrustatterleafvirus，CTLV)弓I起的一种严重的柑橘病害， 1962年该病由Wallace和Drake在美国加利福尼亚州首次发现。CTLV主要通过机械、嫁接和 汁液摩擦传播，也可种子传播。它能引起枳及其杂种作砧木的柑橘树嫁接口不亲和，叶片黄 化，严重时甚至导致整株植株死亡。目前尚无有效治疗该病的方法，主要采用茎尖嫁接和热 处理相结合的方式进行脱除，通过培育无毒苗木加以预防。 关于温度处理、茎尖嫁接处理和两者相结合的方法脱除CTL、，已有报道，也有文献报道 变温组合条件脱除CTLV，但是缺少研究恒温条件下柑橘植株的CTLV含量和温度处理对柑橘 嫩芽的CTLV含量的影响数据，也缺乏短时间变温对脱毒效果和茎尖的影响。本研究利用实 时定量RT-PCR来研究恒温条件及变温条件对茎尖中CTLV含量变化并通过茎尖嫁接比较其对 脱毒效果的影响。具体研究结果如下： (1)恒温条件处理对柑橘甜橙植株叶片中CTLV含量的影响 光照10h／黑暗14h条件下，25℃、30℃和35℃分别处理30d后，甜橙老叶中CTLV的含 量分别出现少量增加，下降，显著下降，随温度的升高和时间的推移，病毒受到抑制或发生 转移。 (2)恒温条件处理对甜橙植株嫩芽中CTLV含量和脱毒效果的影响 25℃处理10d和24d时，嫩芽和嫩芽旁侧老叶中都检测到CTLV，嫩芽前五叶中第一片叶 CTLV含量最低，处理24d时的嫩芽前五片叶CTLV含量略低子10d。30℃处理24d时，嫩芽 前五叶中第一片叶的CTLV含量低于后四叶。35℃处理10d时，嫩芽前五叶未检测到CTLV。 25℃、30℃和35℃处理结果比较发现，25℃