蓖麻矮化相关基因ga2ox的克隆及其遗传转化的研究植物生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

Directed Directed by：pro￡Chen Y6ngsheng Applicant for MaSter de铲ee：Xing Chao (cmp scien∞，Pl觚t Bioch吼i妍∞d MolecIllar Biolog)r) (College ofA鲥culture，hln盯M∞golja UIlive玮ity for N出onalities，ton封iao 028043，ChiIla) 万方数据 目 目 录 l 前言 ．1 1．1 蓖麻概述 ．．1 1．1．1蓖麻种质资源现况 1 1．1-2蓖麻良种发展策略 l 1．2 GA代谢及矮化相关基因 ．．2 1．2．1 矮化 ．2 1．2．2 GA代谢 一2 1．2．3矮化相关基因 3 1．3 G■2似在GA代谢中的作用 ．3 1．4荧光定量PCR技术 3 1．5 遗传转化 一4 1．6 目的意义 一4 2材料与方法 ．．5 2．1 试验材料 ．．5 2．2试验仪器 一5 2．3 试验药品及配方 ．．5 2．3．1 药品 ．．5 2．3．2配方 ．6 2．4试验方法 。6 2．4．1 生物信息学分析及定量分析 一6 2．4．2 克隆RCG么2锻基因 ．8 2．4．3 构建表达载体pC』6山mIAl305．2求CG42饿 12 2．4．4获得转基因植株 ．17 2．4．5转基因植株的检测 ．18 3结果与分析 19 3．1筛选目的基因 19 3．1．1生物信息学分析 ．19 3．1．2砒叮A提取效果及其浓度测定结果 ．．1 9 3．1．3 cDNA浓度测定结果 ．20 3．1．4 荧光定量PCR结果 20 3．2 克隆RcG么2似基因 ．．20 万方数据 3．2．1 3．2．1 扩增尺cGZ2似基因 20 3．2．2 RcGZ2似转化伽5。【大肠杆菌后检测结果 2l 3．2．3克隆基因测序结果 ．22 3．3 构建表达载体pC舳队l 305．2．G■2似 22 3．3．1 pC舳IAl305．2质粒提取结果 ．．22 3．3．2 pC舳IAl305．2质粒经^，cD I酶切和胶回收结果 ．23 3．3．3 印P I酶切pC舳IAl305．2线性DNA结果 24 3．3．4 大片段DNA胶回收结果 ．．24 3．3．5 1碾cG么2似质粒提取结果 ．25 3．3．6 1壤cG■2似质粒经人均I酶切和胶回收结果 25 3．3．7印P I酶切T旅cG么2弧线性DNA结果 26 3．3．8 RcG爿2似的胶回收结果 26 3．3．9 表达载体pCAMBIAl305．2氓cG么2织酶切结果 27 3．3．10 表达载体pCAMBIAl305．2琅cG■2“转化农杆菌G乃』DJ检测结果27 3．4获得转基因植株 28 3．4．1 通蓖5号子叶节对HYG抗性浓度的筛选结果 28 3．4．2获取转基因植株结果 ．28 3．5抗性植株的检测 28 3．5．1 抗性植株与野生型植株表观对照结果 28 3．5．2荧光定量PCR检测结果 29 4 结j念 3 l 5 讨{念 32 5．1 G爿2Dx矮化机制的推测 32 5．2遗传转化体系 32 参考文献 ．33 致谢 ．38 作者简介 ．39 万方数据 插图和附表清单1．表l 插图和附表清单 1．表l 荧光定量PCR反应体系 8 2．表2 克隆尺CG■2甜基因的PCR反应体系 ．9 3．表3 T载体连接反应体系 10 4．表4 菌液PCR反应体系 ．12 5．表5 ^，cD I酶切反应体系 15 6．表6 勋B I酶切反应体系 ．15 7．表7 T4连接酶反应体系 ．．16 8．表8 荧光定量PCR引物 19 9．表9 通蓖5子叶节HYG抗性浓度筛选结果 28 10．图l 表达载体pCAMBIAl 305．2质粒 ．1 3 11．图2 表达载体pCAMB认1305．2．廊G爿2似合成示意图 ．13 12．图3 TB5号和BC2F2矮秆分离株现蕾期茎秆IⅢA提取结果 一19 13．图4 筛选目的基因的荧光定量PCR结果 20 14．图5 RcGZ2似扩增结果 2 l 15．图6 目的基因的胶回收结果 2l 16．图7 RcG爿2似转化DH妃大肠杆菌的菌液PCR结果 22 17．图8 克隆基因的BLAST结果 ．．22 18．图9 pCAMBIAl305．2质粒的提取结果 ．．23 19．图10 ^rcD I酶切pCA^位IAl305．2质粒结果 ．“ 一23 20．图ll ^kD I酶切pCAMBIAl305．2质粒的胶回收结果 ．23 21．图12 印e I酶切线性DNA结果 ．．24 22．图13 胶回收Ⅳ亡D I和印8 I酶切后的大片段DNA结果 ．24 23．图14 T-尺cG■2以质粒结果 25 24．图15 ^