豇豆种子消毒实验.doc

不同消毒剂对豇豆种子消毒效果的比较 1引言 以豇豆种子为实验材料，研究了不同消毒剂及处理时间对豇豆种子的消毒效果，寻找一套适合豇豆种子的消毒方法。结果表明：0.1%HgCl2 10min、5%NaClO 10 min、消毒效果较好，在豇豆种子实际消毒过程中可以参考。 豇豆蝶形花科，在农业生产中占有重要地位。它含有丰富的植物蛋白质，同时含丰富维生素B、C，并且具有一定的药用价值。随着转基因研究的发展，豇豆的消毒灭菌是进行豇豆离体培养的第一步，随着组织培养技术的广泛运用，豇豆的种子是组培的起始材料，由于豇豆种子上通常存在着大量的微生物,特别是豇豆的豆脐位置隐藏大量的微生物，,进而影响无菌苗的培养,使转基因研究和其它组培实验无法进行.实验结果表明,健壮的无菌苗是有效开展豇豆转基因研究和其它组培实验的基础和关键. 因此,对豇豆种子进行消毒是至关重要的。. 目前,用于种子消毒的消毒剂较多,常用的有: 次氯酸钙(Ca(ClO) 、次氯酸钠(NaClO) 、过氧化氢(H2O2) 、升汞(HgCl2) 等. 种子消毒所选择的消毒剂种类以及它们处理种子的浓度和时间对种子的发芽率和幼苗生长高度有着直接的影响。 本文的目的是研究不同消毒处理对豇豆种子消毒效果的影响,寻找一套适合豇豆种子消毒且不影响其种子发芽和幼苗生长发育的消毒方法,为豇豆无菌苗的培育及转基因研究提供一定的技术依据。 2　材料和方法 2.1　材料 选取籽粒饱满、颜色正常、大小基本一致的健康豇豆种子. 2.2　实验方法与培养条件 　 实验方法： 取一定量的种子用70 %—75%酒精消毒30s--60s ,然后用无菌水冲洗1--2次,加入消毒剂消毒.选用4种消毒剂,分别为0.1 %HgCl2 、10 %H2O2 、5%NaClO2. 实验分为两组,第1组为单纯的消毒剂,分别用0.1 %HgCl2 、10 %H2O2 、5%NaClO2处理种子5 ,10和15 min,每处理40粒种子. 第2组为添加吐温的消毒剂,0.1 %HgCl2+吐温、10 %H2O2+吐温、5%NaClO2+吐温，每处理40粒种子. 培养条件： 将消毒处理后的种子接种于MS培养基,置于25℃光照培养室中,在1600--22000 lx光照强度下培养.每天对种子污染率、发芽率、3 cm以上植株所占比率等进行统计记载。 3 结果与分析 　不添加吐温各消毒剂消毒效果 种子接种于培养基,培养至第3 d ,0.1 %HgCl2 、10 %H2O2 、5%NaClO2 各处理的种子大部分发芽. 其中, NaClO2 消毒10 min处理中污染率最低；0.1 %HgCl2 、10 %H2O2和5%NaClO2 各处理植株根系之间没有差异. H2O2 各处理的种子,在第2 d有60 %开始萌动,但种子污染也开始出现，大部分污染是从豆脐开始的，少部分从种皮开始出现绿色的霉状物. 实验中所使用的三种消毒剂对豇豆幼苗茎叶的生长没有影响,没有发现畸形苗.在处理后的第7d ,对不同消毒剂不同处理的种子污染率、发芽率以及3cm以上植株所占比率进行了统计(见表1). 由表1可知,用5%NaClO2 处理豇豆种子10 min ,消毒效果最佳,在第7d时,种子污染率最低,发芽率较高、3 cm植株所占比率也较高;用0.1 %HgCl2消毒处理10 min的豇豆种子污染率较低，3 cm植株所占比率最高. 在三种消毒剂中10%H2O2 消毒效果最差,所有处理污染率都很高. 统计结果经方差分析后表明,3种消毒剂9种处理间====在污染率、发芽率和3 cm植株所占比率存在显著差异. 多重比较后,0.1 %HgCl2、5%NaClO与10%H2O2 各处理间在发芽率方面没有差异;污染率方面,10%H2O2 与0.1 %HgCl2、5%NaClO间存在显著差异,并且5%NaClO处理10 min和其他2个处理间也存在显著差异;在3 cm植株所占比率方面,0.1 %HgCl2 处理5 min、10 min、15min比5%Na2ClO 5%H2O2 在5 min、10min、15 min效果均要好，3个处理间存在显著差异。 因此,9 种处理中用0.1 %HgCl2 处理10. Min 5 %Na2ClO 处理10 min是豇豆种子消毒较为理想的方式 处理方式 消毒时间（min） 萌发率（%） 污染率（%） 3cm植株所占比率（%） 5 70% 27.5% 40% 0.1 %HgCl2 10 80% 7.5% 47.5% 15 80% 12.5% 47.5% 5 100% 100% 35% 10 %H2O2 10 85% 100% 37.5% 15 92.5% 100% 32.5% 5 85% 57.5% 25% 5%NaClO2 10 9