Taqman定量PCR技术检测基因编辑番茄中外源基因拷贝数-生物通.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（１０）：７２８０ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ Ｔａｑｍａｎ定量ＰＣＲ技术检测基因编辑番茄中外源 基因拷贝数体系的建立 任　爽　朱鸿亮 （中国农业大学食品科学与营养工程学院　北京　１０００８３） 摘要　近些年ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９基因编辑技术已广泛应用于作物遗传育种中，经过拷贝数筛选得到 的单拷贝基因编辑株系，可以进行遗传分离获得具有改良性状但不携带外源基因成分的非转基 因植株，消除转基因安全性的风险。目前拷贝数的检测主要采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，但是该方法存在 操作复杂，需要相对大量的植物材料等缺点，不能进行高通量的筛选。为建立简便高效的基因编 辑番茄植株中外源基因拷贝数的检测体系，以内源性基因ＡＰＸ（抗坏血酸过氧化物酶基因）作为 内参基因，外源性基因ＨＰＴ（潮霉素磷酸转移酶基因）作为目的基因，