SEC方法开发中流动相优化.PDFVIP

应用简报 制药与生物制药 SEC 方法开发中的流动相优化 作者 摘要 Richard Hurteau 单克隆抗体 (mAb) 产品的聚集会影响其作为治疗药物的疗效。体积排阻色谱 (SEC) 安捷伦科技有限公司 是一种高效检测治疗性蛋白质和多肽中的聚集体的方法。本应用简报介绍了使用 Wilmington, DE, USA Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱表征标准蛋白质混合物中的单体、二聚体和聚集体过 程中的方法优化。 前言 优化缓冲液和盐浓度是最大程度提高色谱 色谱柱 柱分离效果的关键部分，其目的在于避 • Agilent AdvanceBio SEC 300 Å, 单克隆抗体产品，例如 mAb 、抗体药物 免造成峰拖尾、峰变形、分离度不佳的 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 偶联物 (ADC) 、Fc-融合蛋白、抗体片段 次级相互作用以及由流动相引起的蛋白 （部件号 PL1180-5301） 及其他治疗性蛋白质和多肽，能够治疗许 质聚集3。也可将色谱柱串联使用以提高 • Agilent AdvanceBio SEC 130 Å, 多疾病。mAb 产品在生物制药行业中的 分离度。本应用简报展示了色谱分析中不 7.8 × 300 mm, 2.7 µm 应用正快速增长。预计到 2020 年全球销 同流动相组成对各种大小的蛋白质以及 1 （部件号 PL1180-5350） 售额将达到 1250 亿美元。 色谱柱固定相的影响。流动相中不使用 治疗性蛋白质的制造和生产是一个极其复 异丙醇来减小次级相互作用，因为这对 液相色谱系统 杂的过程，该过程可能包括 5000 多个关 AdvanceBio SEC 色谱柱而言并不需要。 • Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元泵 键工艺步骤2。mAb 产品在生产过程中的 (G5611A) 聚集对其疗效和安全性具有不利影响，并 材料与方法 • Agilent 1260 Infinity 生物惰性自动进 将导致药物审批失败3,4,5 。因此，在生物 样器 (G5667A) 样品 制药行业中，蛋白质和多肽中的聚集体含 • 源自人血清的 IgG ，Sigma， • 用于 Agilent 1200 ALS/馏分收集器的 量是一项关键质量属性 (CQA)。SEC 被视 I4506-10MG 恒温器 (G1330B) 为检测治疗性蛋白质和多肽中的单体、二 聚体、聚集体和降解产物的金标准分析 • SigmaMAb 抗体药物偶联物 (ADC) • Agilent 1290 Infinity 柱温箱 (G1316C) 方法3。 模拟物，Sigma，MSQC8-0.5MG • Agilent 1260 Infin