appliedbiosystems7500荧光定量PCR仪绝对定量简易操作流程.PDFVIP

applied biosystems 7500荧光定量PCR仪 绝对定量实验简易操作流程 SDS 2.0 绝对定量实验简易操作流程  7500定量PCR仪 绝对定量实验简易操作流程 1. 双击桌面图标 ，或从Start All Programs Applied Biosystems 7500 Software 7500 V2.0 开启软件。进入主界面后选择Advanced Setup 。 2. 默认进入Setup 下的Experiment Properties 界面 2.1 输入实验名称 （Experiment Name ） 2.2 确认仪器型号 2.3 在实验类型中，选择Quantitation-Standard Curve 2.4 选择试剂种类 2.5 确认运行模式 3. 进入Setup 下的Plate Setup 界面，编辑基因（Target ）及样本（Sample）： 2    绝对定定量实验简简易操作流流程  3.11 在 界面面中设置基因因及样品。利用 添加加新 的基因，并在Target Name 中编编辑基因名称，Reportter和Quencher 中选择所所标 记的荧光光基团及淬灭灭基团。对对于Quenchher 的选择，如果是MGGB探针，请请选 择NFQ-MMGB ；如果果是TAMRAA探针，请选选择TAMRRA ；如果是是其他形式的的非 荧光淬灭灭基团（如BBHQ ），请请选择Nonee。 3    绝对定量实验简易操作流程  还可以利用其他按钮将之前已添加的基因进行保存(Save Target)或删除 (Delete Target) 。利用 添加新的样本，并编辑样品名称。 3.2 在 界面中进行样品板的排布。利用鼠标单选 或拖曳以选择反应孔，然后勾选左侧的基因及样本，同时在Task 选项中 指定该反应孔的类型 （S 代表标准曲线数据点，U 代表未知样本，N 代 表阴性对照 ）。 3.3 设置标准曲线：利用鼠标单选或拖曳以选择反应孔（一般情况下，每个 梯度设置三个副孔），而后勾选左侧的基因，在Task选项中选择S，然后 在Quantity中输入拷贝数。按照相同操作，完成标准曲线其他数据点的设 置（建议设置5个梯度）。 4. 在Setup 下的Run Method 界面中，设定反应条件。 4    绝对定量实验简易操作流程  5. 点击 ，文件储存成Experiment Document Single Files （*.eds）格式， 然后按下 按钮，反应即开始进行。 6. 实验结束后，点击右上角的Analyze 按钮，软件将显示实验结果： 5