斑马鱼甲状腺破坏性疾病模型的构建中医内科学内分泌专业论文.docxVIP

贵阳中医学院硕士学位论文中文摘要 贵阳中医学院硕士学位论文 中文摘要 目的：利用转基因和红色荧光蛋白示踪技术，构建活体的、由红色荧光蛋白 (mcherry)标记甲状腺可示踪的转基因斑马鱼模型，以此为基础，初步探索使 用药物化学诱导的方法定向破坏甲状腺细胞。为进一步研究以活体高通量筛选具 甲状腺细胞保护或再生的中草药和小分子化合物奠定基础。 方法：利用转基因技术，如DNA酶切、连接、转化及显微注射等，建立红色 荧光蛋白(mcherry)标记甲状腺细胞的转基因斑马鱼系。运用全胚胎原位杂交 与显微镜活体成像技术，证实mcherry标记斑马鱼甲状腺。初步探索在化学遗传 学基础上进一步建立甲状腺细胞破坏的活体转基因斑马鱼模型。 结果：1、将聚合酶链反应(PCR)鉴定正确的重组质粒tol2-th—promoter— nsfb一2a—mcherry进行显微注射，建立甲状腺转基因斑马鱼系。 2、遗传稳定的Fl代甲状腺细胞转基因斑马鱼系的获得依靠荧光显微 镜筛选。显微镜活体成像和全胚胎原位杂交分别从不同的方向证实外源性目的基 因tol 2一th—promoter—nsfb一2a—mcherry整合进入斑马鱼基因组。 3、动态观察活体斑马鱼甲状腺发育情况。从受精后38h从远端心室 心肌的位置到受精后55小时甲状腺细胞沿着咽中线扩张。 4、将10叽M甲硝唑与转基因斑马鱼胚胎共同孵育48小时，定向诱导 直接破坏甲状腺细胞。 结论：1、通过转基因技术，建立了红色荧光蛋白特异性标记甲状腺转基因 斑马鱼系的稳定性。 2、运用全胚胎原位杂交进一步证实了mcherry对甲状腺转基因斑马 鱼系的有效示踪性。 3、通过化学诱导方法对甲状腺细胞进行靶向破坏，初步探索了建立 甲状腺细胞破坏的转基因斑马鱼模型。 4、本研究成功构建了活体的、由红色荧光蛋白标记的甲状腺可示踪 的转基因斑马鱼模型，也初步探索了对甲状腺细胞进行破坏的方法，它为后一阶 段进行活体高通量筛选甲状腺细胞再生和保护的中草药及小分子化合物研究提 供了一个重要的基础。 万方数据 贵阳中医学院硕士学位论文关键词：甲状腺：斑马鱼；转基因 贵阳中医学院硕士学位论文 关键词：甲状腺：斑马鱼；转基因 万方数据 贵阳中医学院硕士学位论文Abstract 贵阳中医学院硕士学位论文 Abstract Objective To establ i sh the vital thyroid gland transgenetiC zebrafish model which be mcherry—labeled and t1’aced by using transgenesis and red fluorescent protein tracing technique as the base of targeted destruction of thyroid celiS under chemical drugs induction．This builds foundation for the further study on protectioll or regeneration of t．hyt’ocytes well small molecule compound with Chinese Traditional Medicinea and vital high—throughput screening which may have way to heIp secure and rebirth thyroid cellS Methods：By using transgenetic technology such as DNA restriction enzyme digestion，DNA 1igation，DNA transformation and micro—injection，the tt’ansgenetic zebrafish line with the thyroid gland cells traced by mcherry has been constructed． Simultaneously，the entire embryo in Situ hybridization and vital microscopy image technique iS adapted to certify that mcherry can label the thyroid cellS of zebrafish and to preliminarily explore the vital transgenetic model of thyroid cel ls destruction the ba．siS of ch