非病毒基因载体介导的sirna动物学专业论文.docxVIP

辽宁师范大学硕士学位论文摘 辽宁师范大学硕士学位论文 摘 ‘要 0 RNA干扰(RNAi)又称基因沉默(gene silence),是由内源性mRNA互补的 ，dsRNA导入细胞之后，引发mRNA降解，抑制此编码的基因表达，发生沉默现 一 象。目前为止，在真菌、动物以及植物当中普遍存在的现象。RNAi有较强的特 。i．o。异性、操作简单而方便、转运效率相对高等优势，所以可应用于基因功能、基因 。，’’治疗以及药物筛选等方面，并且发挥着非常重要的作用。利用Dicer酶，将把导 o一入的dsRNA切割分解成21到25个不等大小的小干扰RNA(small interfering _：1 I．RNA，siRNA)来阻止某些特定基因的表达。本文综述了基因治疗、基因载体、 ’j0脂质体、阳离子脂质体与DNA复合物的细胞内化途径、RNAi、siRNA、质粒以 。‘_ 及脂质体佐剂研究的基础上，实验选用非病毒载体中的阳离子脂质体C／D和商 I品化Lipofectamine 2000，体外RNAi的研究是利用沉默荧光素酶基因来完成。 。主要的实验步骤以及结果如下： |一 _ 第一，转染Hela细胞时，‘使用阳离子脂质体C／D和Lipofectamine 2000运 一__‘j载质粒DNA，观察转染效率；第二，进一步研究阳离子脂质体／siRNA复合物的 延滞反应；第三，细胞转运时，用带荧光素酶基因的基因载体，并且通过使用浓 一度不同的siRNA进行基因沉默，检测基因表达的水平时，利用酶标仪，获得沉 、ij0≯，默的结果数据；第四，使用MTT法来检测C／D和Lipofeetamine 2000的运载与 。i．≯。。转染实验对细胞所产生的毒性做比较。 『．”一。结果表明：C／D和：Lipofeetamine 2000均可高效地转运质粒DNA，并且可与 I siRNA完整结合。在比较低浓度siRNA中，C／D和Lipofectamine 2000／siRNA复 一。，一i合物对荧光素酶基因的抑制水平较高，同时对细胞影响小，随着siRNA浓度增 j__1。 加，细胞存活率逐渐减少。阳离子脂质体C比商品化阳离子脂质体Lipofectamine j÷÷2000沉默率高，但对细胞毒性相对较大。通过优化实验条件，阳离子脂质体可 ·、-“． 以在较低的siRNA浓度下对目的基因进行高效沉默。 关键词：基因治疗；小干扰RNRNA干扰；阳离子脂质体；细胞毒性 Research Research of siRNA mediated by Non-virus vector Abstract —RNM is mediated by the non—virus vector．．dsRNA is mediated into the cancer cells，result in breaking down the mRNA，which make relevant gene not express，SO the process is also called gene silencing．It is one of the most briliant methods in gene —therapy of genatic levels．Currently,this：method is generally used in micology,zoology 。an—d，botally．The adVantage of RNAi is that has better characteristic，use simplely and ，囊conyiniently,transfer efficiently SO and on．Now that it is widely used aS estimating the 0 function of gene，gene therapy and medical selection，which exert important j≥effect．Through the use of small interfering RNA whose size is seperated tO 2 1_25 叠0nucleotides from RNAi perevents some special gene expressing．This dessertation 。ren．ewed the gene threapy,gene vector,liposome，the inner process of the component of cationic lip0SIsome and DNA，RNA