定量蛋白质组学方法的发展及其在乙肝病毒相关肝细胞癌中的应用生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

摘要定量蛋白质组学方法的发展及其在乙肝病毒相关肝细胞癌 摘要 定量蛋白质组学方法的发展及其在乙肝病毒相关肝细胞癌 中的应用 摘要 原发性肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其中90％以上为肝细胞癌，我 国80％以上的肝细胞癌的发病与乙肝病毒的感染相关。以疾病组织样品为基础的 乙盯病毒相天肝细胞癌的蛋白质组研究有着不可替代的临床意义及应用前景。精 确和可靠的蛋白质定量是理解生物学现象尤其是发现有价值的癌症诊治标志物 的基础。定量蛋白质组学技术主要有两大策略：一是基于凝胶染色强度，另一 个是利用质谱检测技术。 以10例肝细胞癌患者的癌组织／癌旁组织为实验对象，传统的双向凝胶电泳 技术和质谱技术为研究于段，建立了包括108个差异表达点在内的差异表达蛋白 质组图谱。运用取阳荧光差异凝胶电泳技术，确定了10对样品间的249个有统 训学意义的著异点，展示出精细定量的筹异表达蛋白质组图璐：运用系统聚类 对这249个差异点进行了整体水平分析，癌组织和癌旁组织分别聚集成两个大 类，而业类的分配则为小例病例的个体筹异性分析提供了线索。 运用凝胶增强．液村I色游串联质谱一稳定同何素亲和标签技术，一次性得到 490种含有定量信息的蛋白质组数据库。激光捕获显微切割技术、稳定l—J位素亲 和标签技术和两维色谱半联质谱技术的联合足进行精确的、大规模的定性和定量 分析新技术，显微剀割的癌组织／癌旁组织的盯实质绌胞蛋白质样品仪用两维色 嘴串联质酷技术或联合稳定同忙素亲和标签技术进行定十牛或定量分析，共．fi 644 种蛋白质得剑峪定，261种蛋白质得以定量。 返』1J基于一维液州包涪串联质涪的非标记定量技术，10对癌绀i：}{／癌旁组织 样品得到5104种含定量信息的蛋白质组数据库；系统聚类显示可以用10对样品 f口J自统计学意义的265种蛋白质从整体水下区分癌组织／癌旁组织两个大类并提 供、IE类分配线索；运用l：l组织冈、丰成分分析和KEGG l叫站资源进行差芹表达 途杼分Ⅳi，其tp的显著性差片表达途千牟_可能在癌变机制中扮演重婪角包。 多组‘史验得到的差芹表达蚩白质纰进行了比较，∥0举了9种市要的肝细胞癌 摘要相关蛋白质的差异表达的免疫印迹实验验证结果；异种核糖核蚩白K是一种重 摘要 相关蛋白质的差异表达的免疫印迹实验验证结果；异种核糖核蚩白K是一种重 要的肝细胞癌相关蛋白质，正在运用免疫组织化学、含有稳定同位素的氨基酸标 记的细胞培养等技术手段进行更深入的研究工作。 关键词：肝细胞癌，乙肝病毒，蛋白质组学，定量蛋白质组学，质谱，双向凝 胶屯泳，双向荧光差异凝胶电泳，稳定同位素编码的亲和标签，凝胶增强．液相 色谱串联质谱一稳定同位素亲和标签技术，激光捕获艟维切割，两维色谱串联质 谱技术，非标记定量技术，生物信息学，系统聚类，自组织图，丰成分分析， 异种核糖核蛋白K AbstractDevelopment Abstract Development of quantitative proteomics and application in hepatitis B virus associated hepatocellular carcinoma Chen Li(Biochemistry and Molecular Biology) Directed by Professor Rong Zeng Abstract Hepatocellular carcinoma rHcc)is a malignancy of both underdeveloped and developing countries．Hepatitis B virus was implicated in the genesis of up to 80％of the HCC that occurred in China．Accurate and reliable protein quantification is essential in understanding basic biological responses as well as discovering valuable bioma“【eTs for disease treatment and diagnosis．Nowadays，there are two main strategies in quantitative proteomics：gel—staining intensity and mass spectrometric—based approaches． Proteomcs of ten pairs of clinical hepatitis B virus associated HCC tissue sampl