中性粒细胞胞外陷阱在细菌性脓毒症中的作用及体外形成的研究临床检验诊断学专业论文.docxVIP

目录摘要 目录 摘要 ．1 (一)中文摘要 1 (二)ABSTRACT ．．3 二、正文 ．5 f一、I前言(一)日lJ舌 5 (二)资料和方法 ．．7 1．实验材料 ．7 1．1一般资料 7 1．2试验试剂与仪器 8 2．操作方法 ．9 2．1中性粒细胞的分离与提纯 9 2．2流式细胞仪测定中性粒细胞纯度 ．．1 O 2．3 NETs的荧光染色 lO 2．4 NETs的免疫荧光染色 1 1 万方数据 2．5细菌悬液的制备 2．5细菌悬液的制备 ．．12 2．6 cKP与hvKP体外形成NETs的检测 1 2 2．7 cKP与hvKP存活率的检测 1 2 2．8试验中的注意事项 ．．1 3 (三)统计分析 ．14 (四)实验结果 ．1 5 1．分离提纯的中性粒细胞 15 2．流式细胞术鉴定中性粒细胞纯度 15 3．夕}、周血中NETs的形成 16 4．NETs的免疫荧光染色 1 8 5．NETs的动态变化 1 8 6．NETs形成的几个主要过程 20 7．cKP和hvKP引发的体内NETs的形成 20 8．cKP和hvKP引发的体外NETs的形成 21 9．细菌存活率的检测 23 万方数据 (五)讨论 (五)讨论 24 (六)结论 27 (七)参考文献 28 三、综述 34 四、致谢 ． ．．45 万方数据 大连医科大学硕士学位论文中性粒细胞胞外陷阱在细菌性脓毒症中的作用及体外形成的 大连医科大学硕士学位论文 中性粒细胞胞外陷阱在细菌性脓毒症中的作用及体外形成的 研究 硕士生姓名：魏繁 指导教师：李玉中教授 专业名称；临床检验诊断学 一、摘要 (一)中文摘要 目的： 探究中性粒细胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps，NETs)在细菌性脓毒 症患者外周血中的形成及其随着疾病进程的变化情况，并研究了普通型肺炎克雷 伯杆菌(classic Klebsiella pneumoniae，cKP)与粘液型肺炎克雷伯杆菌 (hypermucoviscous Klebsiella pneumoniae，hvKP)在体内和体外形成NETs的差异。 方法： 收集2015年5月至11月大连医科大学附属第二医院收入的细菌性脓毒症患 者60例。其中，致病菌为金黄色葡萄球菌的患者有10例，大肠埃希菌10例，铜 绿假单胞菌10例，肺炎克雷伯杆菌30例，这当中包括普通型肺炎克雷伯杆菌15 例，粘液型肺炎克雷伯杆菌15例。此外，选取30名健康体检者设置为健康对照。 分别于患者入院的第一天和第七天收集细菌性脓毒症患者的外周血，密度梯度沉 淀法分离纯化中性粒细胞。荧光染料Sytox Green明确NETs的存在。免疫荧光染 色及核染色剂证明组蛋白H3与DNA共定位于NETs。Image．Pro Plus 6．0微软系统 对NETs进行定量检测，比较脓毒症患者与健康者外周血中NETs的形成情况及脓 毒症患者经过抗生素治疗7天后NETs的变化情况。观察健康体检者的中性粒细胞 分别与普通型和粘液型肺炎克雷伯杆菌孵育1小时后NETs的形成在数量和形态 等方面有无不同，并计算细菌存活率。 结果： 万方数据 大连医科大学硕士学位论文1．60例细菌性脓毒症患者的外周血中检测到了NETs的存在，并且证明了组 大连医科大学硕士学位论文 1．60例细菌性脓毒症患者的外周血中检测到了NETs的存在，并且证明了组 蛋白H3与DNA共定位于NETs； 2．脓毒症患者外周血中NETs的含量(42．358％+1．967)明显高于健康体检者 (0．262％+0．041)，(P0．05)； 3．抗生素治疗7天后，处于感染消散期患者体内NETs的含量(19．7930／o_-I：1．917) 明显低于仍处在感染期的患者(51．191％+5．550)，(P0．05)； 4．由粘液型肺炎克雷伯杆菌(1lvKP)引起的细菌性脓毒症患者的外周血中 NETs的含量(53．865％+1．385)明显高于由普通型肺炎克雷伯杆菌(cKP)引起 的(27．628％+1．425)，(P0．05)； 5．两种不同表型的肺炎克雷伯杆菌分别与健康体检者中性粒细胞作用1小时 后，粘液型肺炎克雷伯杆菌诱发健康体检者中性粒细胞释放的NETs的含量 (44．581％+2．225)明显高于普通型肺炎克雷伯杆菌所释放的(28．022％+1．416)， (P0．05)； 6．两种不同表型的肺炎克雷伯杆菌分别与健康体检者中性粒细胞作用1小时 后，粘液型肺炎克雷伯杆菌的存活率(71．660％+1．446)明显高于普通型肺炎克雷 伯杆菌(32．579％+1．155)，(P0．05)。 结论： 本次试验明确了细菌性脓毒症患者外周血中NETs的存在，且其含量明显高于 健康对照