ras诱导的线粒体功能障碍在肝癌发生发展中的作用机制研究动物学专业论文.docxVIP

目 目 录 一、摘要 ．1 (一)中文摘要 ．．1 (二)英文摘要 ．．3 二、正文 ．5 (一)前言 一5 (二)材料和方法 一6 1材料 ．．6 2方法 ．．8 (三)结果 15 1．病理分析 ．．15 2．线粒体复合物I活性的检测 ．16 3．线粒体呼吸链复合物I／III／IV关键基因的转录组学检测16 4．RT-qPCR检测线粒体呼吸链复合物I／II工／Ⅳ关键酶的 mRNA表达水平 ．．18 5．ROS水平的检测 19 6．RT-qPCR检测Bcl-2和Ucp2 mRNA的表达水平 20 7．ERK抑制剂对p-ERK表达水平的影响 21 8．RTNPCR检测ERK抑制剂处理后线粒体呼吸链复合物I／ III／IV关键酶的mRNA表达水平 ．22 (四)讨论 24 万方数据 (五)结论 (五)结论 27 (六)参考文献 28 三、综述 31 (一)综述 31 (二)参考文献 35 四、攻读学位期间发表论文情况 ．．39 五、致谢 40 万方数据 大连医科大学硕士学位论文Ras诱导的线粒体功能障碍在肝癌发生发展中的作用机制研 大连医科大学硕士学位论文 Ras诱导的线粒体功能障碍在肝癌发生发展中的作用机制研 究 硕士生姓名：庄云芳 指导教师：王爱国教授 专业名称：动物学 摘要 目的：探讨癌基因Ras诱导的线粒体功能障碍在肝癌发生发展中的分子作用 机制。 方法： 1．采集正常对照雄性小鼠的正常肝组织样本和H-rasl2V转基因雄性小鼠的 肝癌组织及癌旁组织样本，分别进行病理分析和总蛋白质和总RNA及线粒体的提 取；采用比色法定量检测试剂盒检测组织中线粒体呼吸链复合物I活性；转录组测 序和RT-qPCR法检测组织中线粒体复合物关键酶及Bcl-2和Ucp2的mRNA表达 水平；免疫荧光测定试剂盒检测组织中的ROS水平。 2．应用ERK抑制剂司美替尼抑制转基因雄性小鼠后检测抑制ERK对线粒体 功能的影响。 结果： 1．比色法定量检测结果表明，与正常雄性小鼠肝组织相比，转基因雄性小鼠 癌旁组织和肝癌组织的复合物I活性均显著降低，F=14．26，P=0．003。呼吸链复合 物I／Ill／IV关键酶的mRNA表达水平检测结果表明，与正常肝组织相比，肝癌组 织和癌旁组织的Ndufal2、Ndufs6、Uqcrb、Cox7a2表达水平均显著降低，统计量 分别为F=18．55，P=0．001；F=7．06，P=0．014；F=12．81，P=0．002；F=10．51，P=0．004。 免疫荧光检测表明，与正常肝组织和肝癌组织相比，癌旁组织中的ROS水平显著 升高，F=3 1．35，P=0．001。与正常肝组织和癌旁组织相比，肝癌组织中的Bcl-2和 Ucp2表达水平均显著升高，统计量分别为F=20．29，P=0．002；F=15．51，P=O．001。 2．抑制实验结果显示：应用司美替尼抑制剂后，蛋白质免疫印迹检测抑制效 万方数据 大连医科大学硕士学位论文果，结果显示，在转基因雄性小鼠癌旁组织中，与对照组相比，司美替尼处理组 大连医科大学硕士学位论文 果，结果显示，在转基因雄性小鼠癌旁组织中，与对照组相比，司美替尼处理组 中P—ERK表达水平显著降低，F=42．99，P=0．022；在转基因雄性小鼠肝癌组织中， 与对照组相比，司美替尼处理组中P．ERK表达水平显著降低，F=43．34，P=0．002； 表明抑制效果良好。线粒体呼吸链复合物I／III／IV关键酶的mRNA表达水平检测 结果表明，在转基因雄性小鼠癌旁组织中，与对照组相比，司美替尼处理组的 Ndufal2、Uqcrb、Cox7a2 mRNA表达水平显著上调，统计量分别为F=4．05，P=0．084； F=11．25，P=0．015；F=31．007，P=0．001。在转基因雄性小鼠肝癌组织中，与对照 组相比，司美替尼处理组的Ndufal2、Uqcrb、Cox7a2 mRNA表达水平显著上调， 统计量分别为F=5．81，P=0．042；F=5．79，P=0．043；F--15．17，P=0．008。 结论：Ras癌基因的表达可能通过ERK信号通路下调肝组织线粒体呼吸链复 合物关键酶的表达，进而导致线粒体功能障碍并提升细胞内ROS水平。肝癌细胞 通过促进Bcl-2和Ucp2的表达降低线粒体产生的ROS，进而促进肝癌的发生发展。 【关键词】Ras癌基因肝肿瘤线粒体功能障碍ROS 2 万方数据 大连医科大学硕士学位论文The 大连医科大学硕士学位论文 The Mechanism of Ras Oncogene Induced Mitochondrial Dysfunction in the Development of Hepatic Tumor Master degree