版纳微型猪近交系与人肝脏合成蛋白功能匹配研究遗传学专业论文.docxVIP

声 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特IIII以标注和致谢的地方外， 论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四 川大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的 同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢 意。 本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的， 论文成果归四川大学所有，特此声明。 由 指 pq川大学博J：学位论文版纳微型猪近交系与人肝脏合成蛋白功能匹配研究※ pq川大学博J：学位论文 版纳微型猪近交系与人肝脏合成蛋白功能匹配研究※ 博士研究生：张磷 导 师：程惊秋教授 李幼平教授 中文摘要 供器官严重短缺是当今移植界所面临的两大难题之一。猪到人异种 移植无疑为解决器官短缺这一矛盾提供新的思路。近年随着免疫学机制 及猪到人异种移植基础研究的不断深入和基因改造技术的不断改进，已 证实猪与人免疫学差异和排斥反应有望得到攻克。但目前国际上有关猪 与人脏器生理功能匹配性研究仍鲜有报道。 肝脏不仅是机体最大的解毒器官，生物转化、代谢、分泌和排泄机 体内、外源代谢产物及药物，清除机体有毒物质。还是机体最主要的生 物合成器官，合成白蛋白、球蛋白，凝血、纤溶和抗凝等血浆中大部分 蛋白质．执行着极其重要的生理功能。异种移植术后，供猪肝脏能否替 代人肝脏执行常规生理合成功能，能否清除机体内、外源性代谢产物， 能否代谢和排泄术后长期大量使用的免疫抑制剂、抗菌及抗病毒药物， 都是异种移植能否最终走上临床必须回答的问题。本研究以版纳微型猪 近交系(Banna Minipig Inbred Line，BMI)为研究对象，分别测定BMI 和人常规肝脏功能及肝脏合成蛋白潜在功能，比较BMI与人肝脏分泌、 代谢能力，肝脏合成蛋白含量和功能差异。结果显示：BMI血清总胆红 素和直接胆红素水平仅为人1／5．1／3；肝脏酶学水平均较人高，门冬氨酸 ※：国家自然科学基金重大项目(批准、CMB资助 l ¨川大学博上学位论文氨基转移酶约为人3—4倍。BMI与人肝脏合成白蛋白及d、口球蛋白总体 ¨川大学博上学位论文 氨基转移酶约为人3—4倍。BMI与人肝脏合成白蛋白及d、口球蛋白总体 水平无统计学差异(口O．05)，但BMI与人不同球蛋白亚型含量存在差 异。BMI白蛋白结合钙能力、总铁结合率和铜蓝蛋白氧化活性较人强 (pO．05)，具有更强的钙、铁贮备能力和抗氧化潜能。本研究通过包被 人血红蛋白(hemoglobin，Hb)于96孔板，利用ELISA方法检测BMI 肝脏合成结合珠蛋白(haptoglobin，Hpt)结合、运输人Hb能力。结果发 现：BMI Hpt可结合、运输人Hb，但单位体积BMI血浆中Hpt结合人 Hb能力低于人(pO．05)。利用Western Blotting技术检测猪与人血浆中 Hpt相对含量。结果显示：BMI血浆中Hpt含量较人低，BMI I-tpt的口 亚基含量与人相当(po．05)，但al和以含量均较人低(p0．05)。提示 BMI与人肝脏合成Hpt亚型及各亚型含量与人不同，表现结合人Hb能 力与人有差异。 本研究以s一腺苷．L一甲硫氨酸(S—adenosyl．methionine，SAM)作甲基 供体，利用红细胞中嘌呤类药物代谢酶(thiopurine S-methyltransferase，TPMT)将6一巯基嘌呤(6-mercaptopurine，6-MP)转 化为6一甲基．巯基嘌呤(6-methylmercaptopurine，6-MMP)，通过HPLC 方法分别检测人、BMI和普通家猪红细胞中转化6-MMP的量计算红细 胞表达TPMT活性，推测猪与人肝脏表达TPMT活性差异。实验结果显 示：BMI和普通家猪红细胞表达TPMT活性约为人1／2。表明：猪肝脏、 肾脏和红细胞分泌、合成TPMT酶活性明显较人低。今后猪到人异种肝 脏和肾脏移植后必须适当减少硫嘌呤类药物用量，以免血药浓度过高毒 副作用发生。 本研究制备BMI凝血因子分别加入缺乏相应凝血因子人血浆检测猪 肝脏合成凝血因子能否启动人凝血瀑布反应，计算BMI与人相应凝m因 子活性。结果显示：BMI凝血因子加入人相应凝血因子缺乏血浆，测定 四川大学博士学位论文其凝血时闻(prothrombin 四川大学博士学位论文 其凝血时闻(prothrombin times，PT)或部分凝血酶原激活时间(activated partialthromboplastintimes，APTT)值均较短但在人『F常范围，表明BMI 肝脏合成凝血因子II、V、Ⅶ、X、Ⅻ能替代人相应凝血因子、激活人 凝缸瀑布反应，引起血液正常凝集，证明