动物腔前卵泡分离培养的研究动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

中 中 文 摘 要 动物腔前卵泡分离培养的研究 摘 要 1．探讨了水牛和小鼠的各级腔前卵泡在卵巢中的分布规律、形态特征及超微结构 特点。(1)水牛和小鼠卵巢中各级卵泡的分布具有明显的区域性，原始卵泡和初级卵 泡分别位于血管稀少的皮质最外层和中层，而次级卵泡位于富含血管的皮质最内层。 (2)水牛成年牛的原始卵泡的直径明显大于胎牛和青年牛(p0．05)，而三者的卵母细 胞直径和颗粒细胞数没有差别；成年牛的初级卵泡的直径和卵母细胞直径显著大于胎 牛和青年牛，颗粒细胞数也显著较多(po．05)。胎牛的次级卵泡的直径和卵母细胞直 径显著小于成年牛和青年牛，颗粒细胞数也显著较少(pO，05)，次级卵泡的颗粒细胞 在2—4层时分布不均，一侧较多，而另一侧较少。(3)7d、14d和28d小鼠的原始卵 泡的直径、卵母细胞直径和颗粒细胞数均没有差异，赤道面颗粒细胞数约为10个。 7d小鼠初级卵泡和次级卵泡直径和卵母细胞直径显著小于14d和28d小鼠，颗粒细胞 也少(p0．05)。(4)水牛和小鼠腔前卵泡的基膜由两层薄而光滑的纤维状结构组成， 线粒体中有帽状结构，卵母细胞的细胞器集中于细胞核附近。 2．探讨了不同分离方法对水牛腔前卵泡分离效果的影响。梳刮法平均每个水牛卵 巢回收所得的腔前卵泡数(152．35士44．81)明显高于剪碎法(32．62士14．81)和显微分 离法(8．95+3．44，pO．05)，且其平均每个卵巢的处理时问(39．054-4．27 min)明显少 于剪碎法(46．43士4．15min)和显微分离法(44．55+7．82min，pO．05)。梳刮法分离所 得的腔前卵泡，其中原始卵泡最多(占41．25％)，其次为初级卵泡(占38．79％)，而 次级卵泡最少(仅占19．95％)。结果表明，梳刮法能有效地分离回收水牛卵巢的腔前 卵泡。 3．探讨了水牛胎牛、青年牛和成年牛卵巢腔前卵泡的分离效果。每个胎牛、青年 牛和成年牛的卵巢分别获得943．43+143．13、249．50-士40．11和128．50土19．99个腔前卵泡， 胎牛卵巢获得的腔前卵泡数量明显多于青年牛和成年牛(po．05)，表明水牛胎牛卵巢 可分离得到较多的腔前卵泡。 4．探讨了剪碎结合酶消化法的水牛卵巢腔前卵泡分离效果。水牛卵巢先用眼科手 术剪刀将其剪碎，然后分别用浓度为0(对照)、0．02％、O．04％、0．08％的胶原酶消化 20min回收腔前卵泡，每个卵巢分别获得33．56士6．15、40．38土6．12、47．75士6．84和 52．69士6．15个腔前卵泡，酶消化组的腔前卵泡数量明显多于单纯剪碎组(pO．05)，表 Vrf 中 中 文 摘 要 明酶消化有助于提高剪碎法的腔前卵泡分离效率。 5．探讨了不同分离方法对小鼠卵巢腔前卵泡的分离效果的影响。梳刮法平均每个 小鼠卵巢回收所得的腔前卵泡数明显高于剪碎法和显微分离法(61．00士9．12 VS 26．30士5．06和14．10-a：4．61，p0．05)，且其每个卵巢的平均处理时间明显少于剪碎法和 显微分离法(30．80士3．91min VS 39．10士4．0lmin和38．40士3．50min，p0．05)，梳刮法分 离所得的小鼠腔前卵泡，次级卵泡最多(占83．6l％)，其次为初级卵泡(占12，13％)， 而原始卵泡最少(仅占4．26％)，表明梳刮法也能有效地分离回收小鼠卵巢的腔前卵泡。 6．探讨了分离方法和水牛年龄对水牛腔前卵泡的体外发育能力的影响。用梳刮 法、剪碎法和显微分离法获得的水牛卵巢腔前卵泡体外培养48h和72h，其存活率差 异不显著(p0．05)。体外培养72h，胎牛腔前卵泡存活率明显低于青年牛和成年牛 (34．69％VS 52．67％、52．03％，p0．05)。剪碎结合酶消化法分离得到的水牛卵巢腔前 卵泡在体外培养72h后的存活率随着胶原酶浓度的增加而逐渐下降，浓度达到O．08％ 时下降达到显著性水平。结果表明，分离操作方法对水牛腔前卵泡的培养存活率没有 影响，但酶消化处理则降低腔前卵泡分离后的培养存活率；水牛胎牛分离得到的腔前 卵泡比青年牛和成年牛分离得到的腔前卵泡更难培养。 7．探讨了卵泡培养密度对水牛腔前卵泡的体外发育能力的影响。培养到10d，单 独培养(每孔放1个卵泡)的卵泡存活率(30．36％)与直径增长(7．71土2．29pro)显 著低于群体培养A(每孔放2—3个卵泡，51．61％、10．19生3．249m)和群体培养B(每 孔放4—5个卵泡，52．24％、10．94士3．801．tm，pO．05)，表明水牛腔前卵泡的群体培养 效果优于单独培养效果。 8．探讨了卵泡大小对水牛卵巢腔前卵泡的体外发育能力的影响。体外培养lOd， 起始直径为101一120和121pxn的