cd-dst癌症化疗药物敏感肥实验项目北京维达健医药科技发展有限公司培训讲义.pptVIP

北京维达健医药科技发展有限公司Q:2692756960)内训讲义 北京维达健医药科技发展有限公司内训讲义 北京维达健医药科技发展有限公司内训讲义 一、单层培养法 获得肿瘤标本，制成单细胞悬液后，加入不同浓度的化疗药，检测细胞的存活量得出药敏试验结论。 特点： 方法简单、实用 失去了体内的三维结构 药物接触浓度与体内不同 人肝癌细胞 二、HTCA法(人肿瘤细胞集落测定法) 将肿瘤细胞分别暴露于各种抗癌药物，再接种到软琼脂上，经过4-6周，肿瘤细胞将增殖并最终长成集落，对照集落形成数量的比较，从而分析受试药物的抗增值效应。 特点： 几乎适用于所有类型的肿瘤 实验周期长（4-6 周） 费时费力，主观性强 骨髓瘤细胞集落 神经母细胞瘤集落 三、HDRA(微小组织块培养药敏实验) 在胶原上培养微小肿瘤组织块（1 mm3），加入化疗药物后，观察组织块对化疗药物的敏感性。 特点： 更接近机体实体瘤环境 方法繁琐 MTT 处理后 四、 SRCA法(肾包膜下移植药敏检测) 在裸鼠肾包膜下接种人类肿瘤组织，肿瘤形成后，将化疗药物注入裸鼠腹腔进行化疗药物实验，通过测量肿块两顶端直径，比较肿瘤体积改变，评估化疗药物效果。 特点： 保持肿瘤原有的生物学特性 能客观反映化疗药物敏感程度 实验动物要求高，价格昂贵 操作过程较复杂、接种成功率低 GFP标记的肿瘤细胞 五、CD-DST法(胶滴肿瘤药敏检测) 将肿瘤细胞包埋于胶原凝胶滴中进行立体培养, 使其在接近人体生理状态的环境中对抗癌药物的敏感性进行定量分析。 特点： 原代肿瘤细胞培养成功率高 少量标本即可进行试验 抗癌药物效果与临床匹配度很高 名称 2D/3D培养 细胞/组织培养 结果判断标准 单层培养法 2D 细胞 形态学的改变或同位素前提的掺入量多少 HTCA法(人肿瘤细胞集落测定法) 2D 细胞 集落形成数量 HDRA(微小组织块培养药敏实验) 3D 组织 测定活细胞数 SRCA法(肾包膜下移植药敏检测) 3D 组织 测量肿瘤块两顶端直径 CD-DST法(胶滴肿瘤药敏检测) 3D 细胞 测定活细胞数 名称 检测物质 颜色 特点 MTT(四氮唑化合物)法 甲臜 紫色 方法简便，细胞量大 ATP-TCA法 ATP 荧光 检测效率高、体内体外符合率较高、自动化程度较高、间质细胞干扰较大 DISC法（区别染色细胞毒检测法） 坚固绿或坚固绿-苯胺黑染料 亮绿色 不需要单细胞悬液、不依赖细胞的分裂，仅应用于血液系统标本 荧光细胞印迹分析法 荧光素 荧光 测试范围广，荧光易淬灭 FCM法（流式细胞术） FDA(乙酰乙酸荧光素)或PI(碘化丙啶)或荧光药物含量等 荧光 所需细胞数量少；测量的参数多，仪器昂贵、技术需求高 中性红染色法 活细胞 红色 操作简便，费用较低，结合成像系统可定量分析 目前体外抗癌药物敏感性试验的问题点 原代培养成功率及试验成功率低 很难做到体外三维共培养，不能良好模拟体内环境 药物接触浓度高 真阳性率低（药敏试验判断为敏感的抗癌药物实际临床效果不显著） 无法区分混在一起的成纤维细胞和癌细胞 数据偏差大 多数方法缺乏临床验证数据 多数方法质控不严谨 CD-DST法实验流程 DAY 1 DAY 2 DAY 3 DAY 9 技术流程图 * * 自1953年国外学者提出化疗的概念后，在半个多世纪的时间里，科学家陆续对药敏试验的个体化治疗方案进行了探索。 直到1997年，小林长运博士提出了CDDST技术。CD-DST技术诞生是积累了其他药敏实验研究的经验，克服了其他药敏实验的不足，在以往药敏实验已经不能完全满足临床需要的情况下应运而生的，是最新的最先进的技术，已经进入日本医保项目近20年，并不断发展完善，非常符合临床癌症个体化治疗的需要。 * 在这里呢，我们根据培养方法和测定原理进行了分类 了解各种检测方法及其区别，理解CD-DST法的优势：三维立体培养，引入图像分析装置定量分析 * 一、单层培养法 不能很好地反映临床用药的疗效 获得肿瘤标本，制成单细胞悬液后，加入不同浓度的化疗药，以形态学的改变或同位素前提的掺入量多少作为检测细胞存活的标志得出药敏实验结论。 优点：简单实用，几乎适用于所有类型的肿瘤，细胞可体外大量扩增，可同时对多药物及不同药物浓度进行测试；也是很好的了解肿瘤生物学反应的实验模型。 缺点：肿瘤细胞生长环境不能模拟肿瘤细胞在体内的三维结构生长环境；药物浓度也与体内的分布存在不同，所以并不能准确模拟用药后药物在患者体内肿瘤组织的疗效。正常细胞污染的程度是实验成败的关键。 * 将肿瘤细胞的活检组织或渗出液制备成单细胞悬液，将肿瘤细胞分别暴露于各种抗癌药物，再接种到软琼脂上，经过1-2周，肿瘤细胞将增值并最终长成集落。通过药