革兰阴性杆菌超广谱β内酰胺酶的研究临床检验诊断学专业论文.docxVIP

革兰阴性杆菌超广谱D一内酰胺酶的研究摘要 革兰阴性杆菌超广谱D一内酰胺酶的研究 摘要 ，“生超广1谱p一内酰胺酶(Extended—spectrum B—lactalnases ESBLs)足导致肠 杆菌科细菌对第三代头孢菌素耐药的最常见机制，ESBLs尤其在肺炎克雷伯菌和 大肠埃希菌最为多见。大多数超广谱D一内酰胺酶由广谱酶TEM_1、2和SHV—l 衍生而来，可以水解氧亚氨基头孢菌素类和单环D一内酰胺类抗生素。近年来， CTX—M型和OXA型ESBLs等非TEM型非SHV型ESBLs不断增多。产ESBI．S 菌株主要引起医院感染，己呈世界流行，成为临床治疗的一大难题。产ESBLs 菌株可以发生垂直传播(克隆传播)，也可以通过质粒或转座子进行产酶基因水 平传播。各地ESBI。S的流行情况差异很大，各个国家和地区产ESBLs菌株的发 生率亦明显不同。国内有关这方面的报道较少，尚缺乏系统的研究。为了了解华 山医院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的流行情况、耐药 性以及酶的型别、产ESBLs菌株感染的临床特征，我们进行了以下六个方面的 研究。 第一部分临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的检测和基因 型分析 为了解临床分离火肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBI。S菌株的发生率、刚 药性、流行性以及可能的酶基因型别，我们采用NCCLS表型确证试验对。仁山医 院1999年临床分离的427株大肠埃希菌和559株肺炎克雷伯菌中进行了产 ESBLs菌株的检测、使用琼脂稀释法测定了产ESBLs菌株对多种抗菌药!助的耐 药性、采用TEM型、SHV型B一内酰胺酶、CTX—M一19roup、TOItO一19roupESBLS 编码基因的通用引物对产ESBLs菌株进行扩增、并且运用PFGE技术对分离自 ICU病房的产ESBLs人肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行了DNA指纹图谱分折。 结果显示，427株大肠埃希菌和559株肺炎克雷伯菌中产ESBLs菌株的榆出 率分别为23．6％{tl 51％，产ESBLs菌株主要分离自ICU和神经外科病膀。产 ESBLs菌株列于大多数p．内酰胺类和非p．内酰胺类抗菌药物(如氨基糖苷类、氟 喹诺酮类、四环索、氯霉素等)明显耐药，对于D一内酰胺类／D．内酰胺酶抑制剂复 方、头孢美唑、利福平较敏感，对于亚胺培南高度敏感；半数以上的产ESBLs 菌株划头孢,tt／J亏呈现敏感；产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对于头孢他啶、 阿米卡星、左氧氟沙星的耐药率有较大差异，产ESBLs大肠埃希菌对上述三药 的耐药率分别为15．8％、48．5％、86．1％，肺炎克雷伯菌分别为79．6％、87．7％、 45．6％。TEM型酶最为常见，SHV、CTX—M一19roup次之，未发现TOll0—19roup； 部分产ESBLs大肠埃希菌和多数产ESBL肺炎克雷伯菌同时产生一种以上的13． 部分产ESBLs大肠埃希菌和多数产ESBL肺炎克雷伯菌同时产生一种以上的13． 内酰胺酶，少数产ESBLs菌株的ESBLs基因型不属于上述的四种基因型。分离 自ICU病房的23株产ESBLs大肠杆菌有10种PFGE谱型，最多见的一种谱型 有5株细菌；73株产ESBLs肺炎克雷伯菌有16种谱型，多数的菌株属于Kpn—A (22株)、Kpn—B(14株)、Kpn—C 02株)三种谱型。 本部分研究表明，产ESBLs菌株在临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌 中较为普遍、且为多重耐药菌株；TEM型是最为常见的D．内酰胺酶型别，crx—M 型ESBLs办较为普遍。在医院ICU病房中存在着同一菌株的克隆传播流行，尤 以产ESBLs肺炎克雷伯菌为著；临床上需要加强检测和防治。 第二部分产ESBLs菌株接合子的ESBLs表型鉴定、质粒分析、D-内酰胺酶型 别和等电点测定 为了了解临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中编码ESBLs的基 因位于染色体或质粒、其传播及扩散特征以及为ESBLs的全编码基因的PCR扩 增、克隆、表达及序列分析的研究提供基础，我们对临床分离的39株产ESBLs 大肠埃希菌和67株产ESBLs肺炎克雷伯菌进行了接合试验，受体菌为E．coli K121037RtF8Lac‘：采用NCCt。S表型确证试验对转移接合子进行了ESBLs的表 型鉴定，琼脂稀释法测定转移接合子对多种抗菌药物的耐药性，采用TEM型、 SHV型B．内酰胺酶、CTX．M—l group、TOHO—l gmupESBLs编码基因的通用引物 对转移接合子进行PCR扩增，超声粉碎法提酶、进行等电聚焦电泳测定酶等电 点，碱裂解法提取供体菌和转移接合子中的质粒、进行电泳分析。 结果显示，I临床分离产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌接合转移的发生 率分别为8