tip30诱导肝癌细胞凋亡信号转导途径的研究发育生物学专业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。 对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方 式标明。本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名： 厘螳 日期：坦垒奎垒臼，。日 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅：本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文： (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：壶缝导师签名：纥竺已日期：理2叠塑f口f2】 山东人学博士学位论文T 山东人学博士学位论文 T I P30诱导肝癌细胞凋亡信号转导途径的研究 中文摘要 研究背景和研究目的 原发性肝癌是我国屉常见也是死亡率最高的恶性肿瘤之一，90年代以来已 占据我国癌性死亡的第二位，同时占世界肝癌死亡人数的53％。原发性肝癌恶性 度高、进展快，且容易发生术后复发和转移，这是限制其疗效的关键因素；并且 在一些情况下，患者不宜手术。肝癌的发生是一个多因素、多步骤的过程。在其 发生过程中。从基因水平探索与肝癌复发和转移有关的变异基因进行修饰或阻 断。打断其改变肝癌细胞转移特性的途径，是提高患者生存率的关键，因而，基 阗治疗可望成为肝癌治疗的一个强有力的手段之一。 肿瘤抑制基因在维持基因组完整性和调节细胞的繁殖、分化和凋亡中起重要 作用，临床应用研究表明：抗癌基因可作为基因治疗的一个有效的武器。研究证 实：将抗癌基因导入癌细胞，可通过诱导靶细胞凋亡和细胞周期阻滞来达到抑癌 目的。用抑癌基因，特别是p53基因，进行的临床实验的结果表明：抗癌基因 治疗不失为一个患者可接受的有效手段。并且，从某种程度上可替代传统疗法， 加强放疗、化疗的临床疗效。 因此，寻找安全、高效的基因载体系统是目前的 迫切任务。 多项实验证实：复制缺陷型腺病毒载体是作为向靶细胞转入抗癌基因的最有 利的手段。腺病毒载体在基因治疗临床应用上的研究已得到广泛而深入的开展。 腺病毒是一种无包膜的DNA病毒。毒粒直径为60～90nm，由20面体的蛋 白质外壳和蛋白质核酸复合核，fl,组成。蛋白质外壳由252种壳粒组成。包括240 个六邻体和12个五邻体。每个五邻体上有一条纤维突起，纤维上带有主要种特 异性抗原决定簇和次要的亚属特异性抗原决定簇。其基因组为线状双链DNA， 长约30～50Kb，山非结构性早期基因(El～FA)、编码结构蛋白的晚期基因和RNA 聚合酶转录予组成。用于肿瘤基因治疗的腺病毒可分为复制缺陷型和复制型两大 类别。其中复制缺陷型腺病毒早期基因EI区缺失，外源基因表达盒被克隆在E1 区或复制非必需的E3区。 山乐大学博l二学位论文近年来腺病毒以其独特的优点而得到广泛应用。(1)宿主范围广，可感染除 山乐大学博l二学位论文 近年来腺病毒以其独特的优点而得到广泛应用。(1)宿主范围广，可感染除 淋巴细胞以外的几乎所有细胞。(2)感染效率高，可感染增殖期和静止期的细胞。 (3)安全性好．不整合到人的染色体中，无插入致突变性。(4)能同时表达多个基 因，可用于联合基因治疗。(5)在包装细胞中能有效增殖，产生滴度高。 本实验中我们采用的是成熟的、商品化的第一代缺陷型腺病毒载体。为了便 于追踪观察，我们选择了带有GFP基因的穿梭载体Track．cmv。这种载体有两段 分别可与Adeasy一1骨架载体发生同源重组的“左臂”(Left arm)和“右臂”(Right arm)。通过共同转染宿主菌BJ5183发生同源重组，从而将外源基因插入Adeasy-l 骨架中。井经过真核细胞的包装形成完整的有感染能力的腺病毒。且利用PCR 和蛋白印迹杂交证明了目的基因的转录和表达。由于我们选择的载体带有绿色荧 光蛋白(GFP)，使得在整个病毒扩增及下一步的细胞实验中观察就更为方便。Ad． TIP30的构建为以后的细胞学实验及动物实验提供了一个有力的工具。 细胞凋亡是细胞的多基因协同调控的程序性死亡过程，是维持细胞数目均衡 和组织大小，保证机体正常生长发育的先决条件。很多肿瘤的发生不仅是细胞增 殖的加快，凋亡受抑也是肿瘤发生的一个重要因素。促凋亡基因的表达增强或凋 亡抑制基因的突变或缺失是使正常细胞恶性变的重要原因。目前已被认识和克隆 的与肿瘤细胞凋亡相关的基因有p53、p21、c．myc及Bcl．2家族蛋白等。它们受 外部或内部信号的刺激被激活或阻断来促进或抑制肿瘤细胞