睾丸组织高表达蛋白trim69在精子发生中的功能研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

北京协和医学院硕士学位论文摘要 北京协和医学院硕士学位论文 摘要 细胞凋亡是维持机体组织平衡的重要生物学过程，泛素化介导的蛋白质降解 与修饰在细胞凋亡调控中发挥着十分关键的作用。TRIM家族(tripartite motif,三 结构域蛋白)是含有RING—finger结构域的蛋白家族，是E3泛素连接酶的最大亚 家族之一，该家族蛋白参与非常广泛的细胞生理病理进程，调节多种生物学过程。 TRIM69是我室从人睾丸cDNA文库中分离并鉴定的TRIM家族的新成员，本实 验室前期的工作发现，TRIM69在小鼠睾丸组织中特异性高表达，可能与精子发 生有一定关系。迄今为止，关于TRIM69在生殖中的功能报道很少。 为了研究TRIM69在哺乳动物精子发生过程中的功能，我们利用Lox．Cre同 源重组系统构建了Trim69 RING—finger结构域特异性敲除的小鼠。经过一系列实 验检测发现，与正常小鼠相比，Trim69 RING—finger结构域敲除后小鼠的精子发 生和生殖细胞凋亡情况未受到明显影响，在给予外界刺激如低压低氧时，依然未 表现出明显的生理差异。之后，我们又利用CRISPR．Cas9系统构建了Trim69全 基因敲除鼠，结果发现将Trim69完全敲除后小鼠确实存在不育现象，但仍需进 一步确定其不育是否是由于Trim69的缺失而导致。此外，为了研究TRIM69在 生精细胞凋亡调控中的作用，我们在体外构建并筛选了过表达人源TRIM69的稳 定细胞系，经过DNA损伤诱导处理(紫外线照射和药物刺激)后发现，与对照 组相比，过表达TRIM69的细胞表现出较明显的抗凋亡特征。而内源性TRIM69 敲低后，细胞在经过DNA损伤诱导处理时比正常细胞表现出更为明显的凋亡现 象。因此，我们认为，Trim69 RING．finger结构域可能不是小鼠精子发生过程中 所必需的，但将Trim69完整敲除后可能导致小鼠不育；在体外细胞受到UV或 药物刺激而引发细胞凋亡时，TRIM69蛋白的表达可抑制其凋亡。 关键词；TRIM69，E3泛素连接酶，精子发生，细胞凋亡，基因敲除小鼠 万方数据 北京协和医学院硕士学位论文A 北京协和医学院硕士学位论文 A bstract Cell apoptosis is an important biological process to maintain the tissue homeosta- sis．Ubiquitin—mediated protein degradation and modification play crucial roles in the regulation of cell apoptosis．TRIM(tripartite motif)family could be defined as one of the largest subfamily of E3 ubiquitin ligascs as they contain a RING-finger domain， which are involved in a broad range ofbiological processes．In this study we isolated a novel gene Trim69 from human testis eDNA library，which belongs to TRIM protein family．In our previous work，we found that TRIM69 specifically expressed high levels in testis，suggesting that it may play a role in spermatogenesis．However,the biological function of TRIM69 is poorly understood． To learn about the potential roles of TRIM69 in mammalian spermatogenesis，we used Lox—Cre homologous recombination technology and corresponding breeding schemes to generate乃砌锣RING domain—knockout mice．Whereas．based on a series of experimental research we found that the deletion of RING domain of Trim69 did not have significant effect on the sper