第32章RNA的生物合成和加工.ppt

第32章 RNA的生物合成和加工 一、DNA指导下 RNA的合成（转录） 模板链：反意义链（antisense strand，(-)链）—— 以该链中的DNA碱基顺序指导RNA的合成即被转录的那条DNA链。 不对称转录  .DNA双链上，仅一股链转录，另一股不转录。 .有意义链与反意义链并非固定不变。 .转录方向都是5’ 3’  （一）RNA聚合酶——依赖DNA的RNA聚合酶（DNA-dependent RNA polymerase,DDRP） 以DNA为模板，催化2个游离的NTP 形成3’，5’-磷酸二酯键 1、大肠杆菌RNA聚合酶的组成 （1）全酶(holoenzyme) 由4种(5个)亚基α2ββ’σ组成 （2）核心酶(core enzyme) α2ββ’ ，参与转录的全过程 （3）σ亚基（起始亚基） 亦称σ因子（σ factor)—转录辅助因子 识别启动子 ω亚基功能未知 大肠杆菌RNA聚合酶的结构示意图 亚基 α2 β β’ σ 全 酶 核 心 酶 全酶= α2ββ’(ω)σ 核心酶= α2ββ’ σ — 开始合成RNA链时必需有σ因子， 一旦合成开始即释放出来 β’— 参与酶与底物的结合， 以及与σ因子和核心 酶的结合 β — 参与σ因子和核心酶的结合， 并参与RNA合成的引发、 延伸 α — 与结合模板、酶的滑动及碱基识别有关 2. 真核细胞RNA聚合酶 在DEAE-Sephadex柱上的洗脱次序称为酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 1、rRNA的加工 原核生物rRNA转录初始物: rRNA基因和tRNA基因组成混合操纵子： 16SrDNA tDNA 23SrDNA 5SrDNA tDNA rRNA转录初始物: 16SrRNA tRNA 23SrRNA 5SrRNA tRNA RNA酶Ⅲ对转录初始物切割 再加工成熟 2、tRNA的加工 原核生物tRNA转录初始物: tRNA基因: ◆Ⅰ型--- tRNA 有 3’-CCA-OH ◆Ⅱ型--- tRNA 无 3’-CCA-OH tRNA转录初始物: ◆与rRNA相连 ◆几个相同(不同)tRNA连在一起 ●加工 RNA酶Ⅲ RNA酶F RNA酶D RNA酶P tRNA核苷转移酶 切开rDNA、tDNA转录产物 间隔序列 从3’端切断前体分子 核酸外切酶,切除Ⅰ型tRNA 3’-CCA-OH下游序列 （核酸+蛋白） （M1RNA） 内切酶，tRNA5’端成熟酶 催化Ⅱ型tRNA形成稳定的3’-CCA-OH （二）真核生物RNA转录后的加工 1、rRNA转录后的加工 rRNA的基因 (rDNA) 转录产物 成簇排列 高度重复序列DNA 核质:(Ⅲ)--不需加工 5s rRNA 核仁:(Ⅰ)--加工 5.8s rRNA 28s rRNA 18s rRNA 2、tRNA的加工 碱基修饰 3’端 5’端 切除反密码环 的内含子 稀有碱基--- Tψ 脱氨 --- AMP IMP 还原 --- DHU 甲基化--- mA mG 添加CCA-OH RNaseP切除多余的核苷酸 RNaseP 在前tRNA二级结构基础上 3、真核生物的mRNA转录后加工 转录产物：hnRNA + 蛋白质 不均一核糖核蛋白（hnRNP） 加帽 加尾 mRNA前体的剪接 5’端：m7GpppGpN 作用:稳定mRNA 5’端 和翻译的起始有关 3’端: polyA尾巴 作用：稳定mRNA 和翻译模板活性有关 剪除内含子，连接外显子 帽0 帽Ⅰ 帽Ⅱ m7GpppGpN m7GpppGmpN m7GpppGmpNm 三、 在RNA指导下RNA和DNA的合成 1、逆转录酶（reverse transcriptase) RNA依赖的DNA聚合酶（RDDP） 这种酶以RNA为模板，在4种dNTP存在及适合的条件下，按碱基配对的原则，合成cDNA (cDNA中无内含子）。 催化三种反应： RNA指导的DNA合成 RNA水解 DNA指导的DNA合成 步骤1 步骤2 作用位置 200~250 （2）真核生物mRNA转录后加工--加polyA尾 外显子 内含子 DNA hnRNA （3）真核生物mRNA转录后加工—剪接 （一） 在RNA指导下RNA合成 （