冬凌草总黄酮对大、小鼠脑缺血耐受模型的干预作用分析.pdfVIP

摘要 摘 要 目的：通过大、小鼠脑缺血耐受模型来研究冬凌草总黄酮对脑缺血耐受模型的保 护作用，并通过测定血清中神经元特异性烯醇化酶（NSE），炎症细胞因子一氧化氮 （NO）、一氧化氮合酶 （NOS）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-8，细胞凋 B 2 Bcl-2 X Bax 3 亡相关蛋白 细胞淋巴瘤因子 （ ）及其相关 蛋白 （ ）、半胱氨酸蛋白酶 （Caspase-3）含量；观察核转录因子NF-κBp65及神经营养因子GDNF、BDNF 的表 达情况；计算脑梗死面积，观察脑组织形态学变化等，从而探讨冬凌草总黄酮对脑缺 血耐受模型的保护作用。 方法：采用阻断双侧颈总动脉血流 10min，恢复灌注120h后，再次阻断双侧颈总 动脉30min，再灌注22h 的方法，复制小鼠脑缺血耐受模型。预处理组小鼠短暂缺血 10min 300mg/kg 150mg/kg 后，尼莫地平组、脑络通胶囊组、冬凌草总黄酮各剂量 （ 、 、 75mg/kg）组分别给予相应的药物灌胃，假手术组、缺血再灌注损伤组、BIT模型组灌 服同体积0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）,每天1次，连续给药5天，造模后第5天（120h） 1h 给药 后，除假手术组外，其余各组小鼠分别阻断血流30min，再灌注22h，取血清 检测血清中NSE水平，取脑测定组织脑中NO含量及NOS活力的变化，观察脑组织病理 形态学变化。 采用双侧颈总动脉短暂阻断10min作为预处理时间，恢复灌注72h后，采用线栓 法阻塞左侧大脑中动脉2h，再灌注22h的方法（2VO+MCAO），复制大鼠脑缺血耐受模型。 预处理各组大鼠短暂缺血10min后，尼莫地平组、脑络通胶囊组、冬凌草总黄酮各剂 200mg/kg 100mg/kg 50mg/kg 量（ 、 、 ）组分别给予相应的药物灌胃，假手术组、缺血 再灌注损伤组、BIT模型组灌服同体积0.5%羧甲基纤维素钠 （CMC）,每天1次，连续 给药3天，给药1h后，除假手术组外，其余各组大鼠进行MCAO手术，再灌注22h后， 评估大鼠神经功能缺失，测血清中NSE水平，脑组织TTC染色计算梗死面积，测定脑 匀浆中TNF-α、IL-1β、IL-8、Bcl-2 、Bax、Casp-3 的含量，常规HE染色观察脑组织 病理形态学变化，免疫组化法观察GDNF、BDNF、NF-κBp65蛋白表达情况。 结果：小鼠脑缺血耐受模型及大鼠脑缺血耐受模型复制成功。冬凌草总黄酮能降 低大、小鼠死亡率，显著降低大鼠神经功能缺失评分，减少大鼠脑梗死面积，降低大、 小鼠血清中NSE水平，提高小鼠脑组织中NO含量及NOS 活力；升高大鼠脑组织中 TNF-α IL-1β Bcl-2 IL-8 Bax Casp-3 GDNF 、 、 含量，降低 、 、 含量，促进神经营养因子 、 BDNF蛋白表达，抑制NF-κBp65蛋白表达；改善大、小鼠脑组织皮质及海马区的病 理损伤情况。 NO NOS TNF-α IL-1β 结论：冬凌草总黄酮通过诱导产生低浓度的细胞因子 、 、 、 刺激机体产生内源性的保护机制，提高神经元的抗损伤能力；升高脑组织中Bcl-2 蛋 1 冬凌草总黄酮对大、小鼠脑缺血耐受模型的干预作用研究 白含量，降低Bcl-2 相关蛋白Bax含量，抑制NF-κBp65蛋白表达，抑制半胱氨酸蛋 白酶3 （Casp-3）活性，