弓形虫病和广州管圆线虫病的免疫学诊断研究病原生物学专业论文.docxVIP

博士学位论文弓形虫病和广州管圆线虫病的免疫学诊断研究 博士学位论文 弓形虫病和广州管圆线虫病的免疫学诊断研究 博士研究生：李华 指导教师：陈晓光教授 摘 要 第一篇基于rSAGI蛋白的弓形虫ELISA试剂盒 的构建及应用 弓形虫对人类危害严重。诊断在弓形虫病的防治中非常重要。而目前从诊 断标准、检测指标到市售试剂盒的检测效果都存在着争议和差距。其重要原因 之一在于所采用的虫体粗抗原成份复杂且难以标准化。 弓形虫主要表面抗原l(SAGl)是目前国内外研究较多的具有强免疫原性 的优势诊断分子，本室前期工作已实现了SAGl在大肠杆菌的可溶性表达，且 证实其具有良好的免疫反应性。本文在此基础之E，进行了以下研究： 1．标准血清的鉴定 标准血清的确定是评判试剂盒质量的前提，本研究采用免疫电镜技术确定 免疫兔血清、SAGl单克隆抗体和正常兔血清中针对膜抗原的抗体的有无，并以 此作为标准参考虹清，建立玻片虫体酶联染色试验(TSHE)和免疫印迹试验(IB) 方法；用TSHE和IB确定了一批弓形虫]gG和IgM抗体阳性和阴性血清，为评 价基于重组抗原的弓形虫检测试剂盒提供了可靠的标准血清。 2．弓形虫rSAGl蛋白的表达、纯化及鉴定 标准化试剂盒的构建需要规模化生产抗原，以摇菌方式获得目标蛋白因较 难避免抗原的批间差异而满足不了需要。本研究比较了摇菌、普通发酵和高密 度发酵3种工艺生产重组弓形虫主要