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不明原因男性不育症患者中精子特异性乳酸脱氢酶基因突变的检测及其临床意义临床检验诊断学专业论文
一
一 鲤丝堑型丝墼
英文缩略词表
躺 英文全称 中文全称
一 lactate dehydrogenase C4 乳酸脱氢酶C4
base pair 碱基对
single nucleotide polymorphism 单个核苷酸多态性
acetonitrile 乙腈
ampieillin 氨苄青霉素
amplification refractory mutation system 扩增阻滞突变系统
碲姗蝌却|薹啪瞰 isopropy-13—·D--thiogalaetoside 异丙基硫代-B.D.半乳糖苷
tetracycline 四环素
Luria Bcrtani medium LB培养基
协蚶 nieofimmide—ade力jIle dinucleotide 氧化型辅酶I
(oxidize)
nitroblue tetrazolium 硝基四氮唑蓝
m一 denaturing hi曲perfommce liquid 变性高效液相色谱法
chromatography
polymerase chain reaction 聚合酶链式反应
嗽髓 ethidiuln bromide 溴化乙啶
triethyalmmonium acetate 三乙基乙酸铵
dithiothreitol 二硫苏糖醇
~肿册 sperm wash buffer 精子洗液
revolutions per minute 转/分
sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠
ethylenediamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸
dimethylformamide 二甲基甲酰胺
∞哪一啪哪 Phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲生理盐水
学位论文原创性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明
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作者签名(手写)..冷坞 导师签名(手写):』幺盈刍L一
.丕绥 年—臣月—垒日 竺!釜年—』月上日
学位论文版权使用授权书
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(保密的学位论文在解密后适用本授权书)
作者签名 (手写): 监 导师签名(手写).兰放聋
.丝翌年』月旦日 年』月也日
福建医科大学2005级研究生毕业论文不明原因男性不育症患者中精子特异性乳酸脱氢酶基因突变
福建医科大学2005级研究生毕业论文
不明原因男性不育症患者中精子特异性乳酸脱氢酶基因突变 的检测及其临床意义
中文摘要
精子特异性乳酸脱氢酶通常由四个C亚基组成,因此又称为乳酸脱氢酶C4 (U)HC4),是精子能量代谢的一个关键酶,与精子的生成、代谢、获能等有密切 关系。在不育症患者中与精子活力缺陷相关的占82%,直接由于精子活力下降导致 不育的占20%。LDHC4是精子发生中特异性表达的抗原,LDHC4基因的缺失或突变 可导致LDHC4酶在质和量上发生改变,影响精子的活力,导致男性不育。
本研究用LDHC4特异性底物对精子U)HC4进行活性染色,利用DHPLC技术对
LDHC4活性染色低下的不育症患者的LDHC4基因进行突变筛查,对DHPLC峰形异 常的PCI铲物进行序列测定,再用T克隆确证突变的存在,最后设计ARMS在一组正 常人群检测筛查到的突变。结果表明,在不明原因不育症患者中活性染色筛选到一
组精子LDHC4活性明显下降的患者,占6%以上。在这组患者中,有1名患者的LDHC4 基因的PCILW物在DHPLC中呈异常洗脱峰。对这一PCR产物进行序列测定,发现患 者LDHC4基因第5外显予的115碱基发生了T—A的杂合改变,该突变使U)HC4基因 的178位密码子由原来的TTG(编码亮氨酸)变为TAG(终止密码子),称L178X突变。T 克隆实验进一步证实了该无义突变的杂合状态。通过针对L178X突变的ARMS实验, 在一组正常人(20例)未检测到该突变。这一杂合突变导致精子发生过程中LDHC4的
表达量大大减少,从而影响精子的能量代谢,最终影响其受精能力。本研究在国际
上首次在男性不育症患者中发现了LDHC4基因的突变,初步证明了LDH
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