cd137信号对cik细胞增殖和功能调节的研究肿瘤学专业论文.docxVIP

褥东医科大学硕士学位论文CDl 褥东医科大学硕士学位论文 CDl 37信号对C l K细胞增殖和功能调节的研究 研究生 朱弘清 导师 束永前教授 南京医科大学第一附属医院肿瘤中心 中文摘要 共刺激分子CDl37是近年新发现的飘婚R超家族的新成员，其主 要表达在活化的T细胞、自然杀伤细胞(natural killer，NK cells)和树 突状细胞(dendritic cells，DCs)表面。研究发现CDl37与其配体结合 后，介导的共刺激信号可促进T细胞和NK细胞增殖、诱导细胞因子 的分泌以及减少活化诱导的细胞死亡(activation-induced cell death， AICD)，增加细胞存活能力。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cells，CIK细胞)是一种新型的具有广谱杀瘤活性的非主 要组织相容性复合物(non-major histocompatibility complex，M日[C)限制 性的免疫效应细胞。但目前CIK细胞的扩增效率和治疗实体瘤的疗效 仍有待进一步提高。CIK细胞为一群异质细胞群，包括CD3+CD56+细 胞和CD3+CD8+细胞，其中CD3+CD56+细胞是CIK细胞发挥直接和间 接抗肿瘤作用最主要的效应细胞。因此通过提高CIK细胞中 CD3+CD56+细胞的数量和抗肿瘤的活性可有效提高CIK细胞过继免疫 治疗的疗效。然而麓前CDl37信号对CD3+CD56+细胞亚群的功能调节 国内外未见报道。在本研究中，通过CDl37mAb激活CDl37共刺激 2 粥泶医科大学硕士学位论文信号通路，可以显著提高CIK细胞的增殖能力和杀伤活性。在此基础 粥泶医科大学硕士学位论文 信号通路，可以显著提高CIK细胞的增殖能力和杀伤活性。在此基础 上，探讨CDl37信号对CIK细胞功能的调节机制。本实验结果为提 高CIK细胞治疗实体瘤的疗效提供新的理论依据。 爵的：探讨CDl37信号对健康人乖肺癌患者外周血来源的CIK细 胞的扩增和功能调节作用。 方法：分离健康人争肺癌患者外周血单个核细胞(periph酬blood mononuclear cells，PBMCs)，实验组在常规CIK培养体系中加入CDl 37 单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)，即CDl37一CIK组；对照组 在常规CIK培养体系中加入鼠IgGl同型对照，即IgGl一CIK组。 健康人CIK细胞：(羔)苔盼蓝拒染法细胞计数分析细胞增殖；(2)LDH 酶释放法检测CIK细胞对A549细胞杀伤活性；(3)加mex证v-FITC／PI 试剂盒检测CIK细胞凋亡率；(4)流式细胞术检测CIK细胞表型分布 7夏．CD3+CD56+细胞内细胞因子及其表面NK细胞受体(NK cell receptor, NKR)的表达；(5)CIK细胞和CD4+Th0细胞共培养后，流式细胞仪 分析CD4+T细胞肉IFN-Y和纯．4的表达水平。 肺癌患者CIK细胞：(1)流式细胞术分析CIK细胞表型；(2)LDH 酶释放法检测CIK细胞对A549细胞杀伤活挂。 结果：健康人：(1)CDl37．CIK组细胞体外扩增效率显著高于 IgGl。CIK组，CDl37一CIK组细胞浓度最高达(9．8强0。57)×106／ml； IgGl。CIK组浓度最高为(7．02+0．68)x106／ml(p0．05)；(2)培养至28天， CDl37．CIK组和IgGl一CIK纽细胞中CD3+CD56+细胞比例分别达到 (39．86+4．69)％和(29．144-5．12)％(p0．05)；(3)培养至14天，CDl37一CIK 3 辩京医科大学硕士学位论文组细胞凋亡坏死率明显低于IgGl一CIK组；(4)CDl37一CIK组细胞体外 辩京医科大学硕士学位论文 组细胞凋亡坏死率明显低于IgGl一CIK组；(4)CDl37一CIK组细胞体外 杀伤肺癌细胞株A549活性高于对N组(20：l，P0．05；10：1和5：1时， P0．05)；(5)培养至l 4天，CD1 37mAb上调CD3+CD56+细胞内IL一2， IFN-T，n晒．伐表述，同时下调IL．4，TGF—pl，IL-10表达；(6)与IgGl一CIK 组相比，CDl37．CIK组中CD3+CD56+细胞表面NKG2D的表达较 迳G1一CIK组明显增强，而NKG2A的表达则减弱；(7)结果显示， CDl37，CIK组细胞可显著提高CD4+T细胞IFN--7表迭水平，同时降低 Ⅲ一4酌产生。 肺癌患者：(i)g 28天，CDl37．CIK组和IgGl一CIK组中CD3+CD56+ 细胞比铡都显著提高，分别这到(30．1+7．3)％和(21。7a：5。7溉(p0．