生物物理最终版期末总结.docVIP

荧光： 荧光产生的机理是什么？ P233 (一)荧光的产生 分子的能量状态 在光学分析屮涉及的分子能级： Eo=Ee+ Ev 4- Er Ee：价电子运动能(电子能级),electron Ev：原子在平衡位置附近的振动(震动能级),vibration Er：分子绕其重心的转动能(转动能级)，rotation 其屮 AEe AEv AEr 分子的能级 Energy Levels 与跃迁 Transition 荧光技术研究的生物学样品的主要参数有哪些？量子产率与荧光强度的区别及关系是 什么？荧光偏振的意义是什么？ P234-237 荧光分光光度术屮的参量： 荧光光谱及主要谱参量 荧光光谱包括：镜像对称。 激发光谱(excitation spec(rum)(波长：kex 最大激发波长)； 发射光谱(emission spcctnim)(波长：Xem, Xmax 最大发射波长)。 荧光强度(fluorescence intensity, F, I)与量子产率(quantum yield, 0) 荧光强度的定义：在一定激发波长(入ex)作用下，发射的荧光强弱。由于发射的荧光为 一光谱，所以发射的荧光强度常常是指发射某一波长的荧光。测得的F不是光能量的绝对 值大小或光子数，而是在一定的仪器条件下测得的一种相对强度。 (|)二发射光子数/吸收光子数。表示某种物质的发光本领。任何物质的(|)不会大于1,且同 一物质在不同的环境下，e不同。 F=(|)Ia, Ia=I0-L I=Io1O*￡cL-F =(|)I()(l-10tcL)- f当C很低时F= e Io ￡ cL—F与C成正比； f当C较大时F=I0(|)-*F与C无关。 荧光偏振(fluorescence polarization) 荧光偏振度 Fluorescence polarization- P=(I//-I±)/(I//+Ii) 荧光各向异性 Fluorescence anisotropy— A二(I〃-I丄“(I//+2I丄) 荧光偏振度的物理意义： A： 1〃二1丄，P=0,自然光，荧光分子运动很快，取向随机。(稀溶液) B： 1〃或I丄为0, P二±1,偏振光，荧光分子运动很慢，取向有序。 C： 1“工1丄丸，0Pl,生物大分子的荧光属于这种情况。 荧光寿命(fluorescence lifetime—t) 荧光衰减为原來激发时最大荧光强度的1/e所需要的时间。 I=Ioekt, T=l/k 荧光探针(fluorescence probe) 具有环状共觇双键即JT电子系统； 量子产率随环境变化，而且变化很大； 能产生稳定荧光的小分子； 藻胆蛋白 phycobiliprotein 绿色荧光蛋白 Green Fluorescent Protein 与研究对象的特定基团共价结合或与蛋白质非共价结合。 举例说明荧光技术的应用？ P239-244 如果婴幼儿体内缺乏使苯丙氨酸转变为酪氨酸的酶时，则苯丙氨酸的含量异常增大而患 “苯丙酮尿症”且易引起智力低下，所以，对婴幼儿的该项体查极为重要，但是，由于血 液蛋白质中其它芳香氨基酸的影响而难以测出苯丙氨酸的含量，请用本课程所学内容提 出一个检测方案。 P239 下-240 上 蛋白质中同时存在酪氨酸色氨酸苯丙氨酸时由于能量转移很难测出苯丙氨酸或酪氨酸，这时 可用印三酮余苯丙氨酸特异性结核生成荧光衍生物的特点测定苯丙氨酸，其中激发峰365nm 荧光峰515nmo婴幼儿在患苯酮尿时由于缺乏苯并转为酪氨酸的酶使苯丙含量启j,引起智能 低下，用上述方法只需50微升血清即可检查。 NMR 1题：NMR中外加磁场的作用？ 为了使自旋核产生能级分裂而对电磁波产生共振吸收。 2题：?NMR中提高外加磁场的强度的作用？ 书247页18-2 F边一段，捉高外加磁场，增大能级差，以增加分辨率；抵消电子的屏蔽作 用。为了满足共振条件：妒卅0,即可引起原子核两个能级间的跃迁。共振条件的推导在前 两页。 3题：NMR中如何区分化学位移和J偶合？ 理论上讲，同种原子核处于同样的磁场中能级裂分，接受射频时应该在同一位置发生共 振。不同基团中的同种核，因屏蔽不同,造成共振峰位不同，从而产生不同的化学位移。详 见 p248o J耦合是核与核之间以价电子为媒介相互耦合引起谱线分裂的现象，即自旋裂分，见248 页。 化学位移与场强有关，J耦合与场强无关，由基团之间的自旋相互作用引起。通过调节 分辨率可以区分，提高分辨率才会出现的是J耦合。具体见书248、249页。 4题：如何理解NMR中峰宽？ 249页第二段，表示物质的量。 蛋白质折叠： 联系生物物理技术部分所学内容，哪些技术可以用来进行蛋白质折叠研究，其根据是什 么？ 生物物理书P22-P23 技术：CD： p227