重组大肠杆菌利用废纸水解液发酵产L乳酸.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（５）：４９５４ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 重组大肠杆菌利用废纸水解液发酵产 Ｌ乳酸 熊圆圆　卢传东　陶　冶　赵锦芳 （工业发酵湖北省协同创新中心　发酵工程教育部重点实验室　湖北工业大学轻工学部　武汉　４３００６８） 摘要　前期通过基因工程手段，构建了一株大肠杆菌工程菌Ｅ．ｃｏｌｉＷＬ２０４，该菌株可以有效利用 木糖为底物发酵产Ｌ乳酸。以废纸为发酵原料，研究该菌株利用木质纤维素发酵产乳酸的特性。 原料以稀硫酸预处理后，经纤维素酶酶解，得到的水解液用 Ｃａ（ＯＨ）脱毒后，接种 Ｅ．ｃｏｌｉ ２ ＷＬ２０４，在７Ｌ发酵罐中发酵７２ｈ，每 １００ｇ废纸可以产生３１ｇ乳酸，糖酸转化率为７９％。结果表 明，Ｅ．ｃｏｌｉＷＬ２０４可以木质纤维素原料为底物发酵生产Ｌ乳酸，具有一定的工业化开发潜力。 关键词　大肠杆菌　Ｌ乳酸　废纸　木质纤维素 中图分类号　Ｑ８１５ 　　全球乳酸需求量每年都在增长，而且有研究发现 　　目前，利用木质纤维素原料发酵产乳酸的菌株主 乳酸每年的平均产量约０．６８亿ｋｇ并呈现每年１０％～ ［１１］ 要 集 中 在 Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｏａｇｕｌａｎｓ 、 Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ［１］ ［１２］ ［１３］ １５％的增长趋势 。由Ｌ乳酸经聚合形成的聚乳酸因 ｒｈａｍｎｏｓｕｓ 、Ｒｈｉｚｏｐｕｓｏｒｙｚａｅ 等菌株。这些产乳酸微 其可塑性、生物可降解性和生物可相容性在医学和环 生物一般戊糖利用率较低，从而无法有效利用来源于 ［２３］ 保中应用相当广泛 。乳酸可通过化学方法合成或 纤维素生物质水解过程中产生的戊糖（主要是木糖）。 以微生物发酵途径获得。通过化石燃料以化学合成手 这是木质纤维素转化乳酸效率过低的主要原因。一株 段获得的乳酸是外消旋的，因此目前 Ｌ乳酸的生产几 稳定的产 Ｌ乳酸的重组大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉＷＬ２０４由本 ［４］ 乎都是通过发酵途径实现 。但是这种以淀粉或精炼 １４］ 实验室构建获得 。该菌株可以利用葡萄糖为底物， 的糖为原料生产乳酸的成本过高，以低廉的木质纤维 也可以有效利用木糖生产Ｌ乳酸。本研究通过对废纸 素原料替代糖和淀粉是至关重要的。 的组成成分、稀酸预处理及酶处理后水解液组分的分 　　现阶段，对木质纤维素原料发酵产乳酸的研究主 析，利用Ｅ．ｃｏｌｉＷＬ２０４发酵水解液，探究大肠杆菌以木 ［５］ 要集中在原料预处理新工艺的开发 、发酵方式及工 质纤维素为原料发酵生产乳酸的特性。 ［６７］ 艺的优化 等方面。从另外一个角度来看，如果从工 艺源头找到合适的木质纤维原料，将非常有利于后续 １　材料与方法 的预处理及发酵过程，无疑也可大大提高木质纤维素 １．１　材　料 转化乳酸的效率。废纸在制浆造纸过程中由于脱除了