肠源性内毒素血症在肝炎慢性化中的作用及其有关机制的分析肝脏病理生理学专业论文.docxVIP

博t啼}文2加2肠源性内毒素血症在肝炎慢性化中 博t啼}文2加2 肠源性内毒素血症在肝炎慢性化中 的作用及其有关机制的研究 博士生 刘近春 导师 韩德五 摘 要 肝病的发生发展中常常伴有肠源性内毒素血症(intestinal endotoxemia，IETM)，IETM是急、慢性肝功能衰竭发生发展的重要机制 之一。反复与持续的炎症反应与进而发生的IETM刺激枯否细胞，所释放 的诸多细胞因子、炎性介质、自由基、一氧化氮(NO)与内皮素一1(ET—1) 而引起的肝细胞损害、炎症反应及肝微循环紊乱，是肝炎慢性化的基础。 我们以往的研究表明内毒素参与了肝纤维化的形成与发展，但对其机制仍 有待于深入的研究。 本研究共分三部分：(一)肠源性内毒素血症与肝纤维化；(二)NO在 LPS诱发肝硬化大鼠发生肝功能衰竭中的作用：(三)抑制LPS生物学效应 对肝炎慢性化的作用。 f第一部分研究目的是：①观察内毒素血症在致肝纤维化形成的过程中 诱发的促炎、促纤维化因子(肿瘤坏死因子．Ⅸ)和抗炎、抗纤维化因子(白 细胞介素-lO)问的动态变化，进一步探讨肝纤维化形成的机制。②探讨 内源性N0及其反应产物过氧亚硝酸阴离子(ON00一)以及外源性N0对肝微 循环障碍的影响在肝纤维化发生发展中的作用。 在实验一将大鼠分成；①正常对照组：饲以普通饮食；②肝纤维化组： 在实验一将大鼠分成；①正常对照组：饲以普通饮食；②肝纤维化组： 采用复合因素致肝纤维化动物模型，分别于实验2，4，8周末取大鼠进行 实验，观察血浆内毒素、TNF吨、IL．10及肝组织胶原蛋白含量的变化、肝 脏组织学改变和肝脏TNF-嘏．1L．10mRNA的表达。结果表明，血浆内毒 素水平各实验组均明显高于正常对照组，且随着肝纤维化的加重内毒素水 平逐渐升高；血浆TNF—a水平在4周末组和8周末组明显高于正常组和2 周末组，也随肝纤维化的发生发展而逐渐增加；血浆IL．10水平各实验组 均明显高于正常对照组。但以4周末组最高。8周末几一lO水平下降，与2 周末组相接近；肝组织胶原蛋白含量随肝纤维化的加重而逐渐增高，4周 末组和8周末组明显高于正常组和2周末组。血浆内毒素水平分别与TNF吨 水平和肝组织胶原蛋白含量呈正相关(分别为：r=0．797。Po．Ol；r：o．903， P0．01)；TNF飞与胶原蛋白含量呈正相关(F0．885。P‘0．01)。肝组织学 显示：4周末组炎症反应明显，而8周末组炎症反应较轻。上述结果表明， 肝纤维化发生发展中伴有IETM，内毒素通过激活枯否细胞释放促炎、促 纤维化因子(如TNF飞)，同时在纤维化早期由于炎症反应明显，使抗炎、 抗纤维化因子(如m-10)释放增加，随病变进展炎症反应减轻以及TNF-值 的持续增高，使IL-lO水平下降，促进肝纤维化的发展。因此，IETM促 进肝纤维化发生发展的机制与促炎、促纤维化因子和抗炎、抗纤维化因子 之间失衡有关。 在实验二将大鼠分为4组：①control：正常对照组，以正常饮食喂 养；②职：肝纤维化对照组，仍采用复合因素致肝纤维化模型，同时用 生理盐水1．5ml·只。1·d-I灌胃；③HF+Arg：以肝纤维化对照组为基础， 同时予L-ArglOOmg·Kg-1·d1灌胃；④FiF+NNA：以肝纤维化对照组为基础， 予LNNA20mg·Zg-1·d-1灌胃。于实验4周末，观察血浆内毒索、NO、丙二 醛(啪A)和超氧化物歧化酶(SOD)水平；观察各组肝组织纤维增生程度 2 7、坐!苎竺查竺 7、 坐!苎竺查竺 竺竺查!竺三一——一 及免疫组化检测肝组织NT的表达；用台盼蓝原位灌流肝脏来观察肝脏微 循环的改变。结果表明血浆内毒素水平在}iF组和HF+NNA组均明显高于 control组，HF+Arg组内毒素水平虽比control组高，但差异无显著性； No水平以HF+Arg组最高，明显高于其它各组，而HF+NNA组最低，明显低 于其它各组，腰组明显高于control组；血浆MDA水平各实验组均明显高 于control组，以HF+NNA组最高；血浆S01)活性盯组和HF+NNA组明显 低于control组和llF+^rg组：肝脏纤维组织目标面积各实验组均明显大 于control组，盯组明显大于llF+Arg和HF+NNA组；肝组织免疫组化NT 在}IF组表达最强，HF+NN^组表达最弱；用台盼蓝原位灌流肝脏发现HF组 灌流时间最长，耶十Arg组与control组比较差异无显著性。结果表明，内 毒素刺激iNOS表达增强，内源性N0的合成与释放增加，内毒素还使肝内 炎症反应加重，氧自由基增多并与No反应生成ON00一，后者在肝纤维化形 成中起重要作用。外源性N0可能通过改善肝脏微循环，防止肝脏缺血和 炎性细胞介质诱导的氧化损伤，延缓肝纤维化的