草莓snrk2家族成员在草莓果实品质形成中的作用分析---李冰冰.doc

PAGE PAGE 4 中国农业大学 本科生“URP”计划立项申请书 项目名称 草莓 SnRK2 家族成员在草莓果实品 质形成中的作用研究 申 请 人 李冰冰 工作单位 中国农业大学园艺学院 联系电话 电子信箱 libingbing@cau.edu.cn 填表日期 2018-12-26 中国农业大学教务处制 项目名称 草莓 SnRK2 成员在草莓果实品质形成中的作用研究 项目起止时间 2019.3-2020.03 项目申请人情况 姓名 李冰冰 性别 女 出生日期 1983.08 最后学历与学位 博士 专业技术职务 副教授 从事专业 果树学 项目概况 果树果实发育和成熟是果树学研究的核心问题之一。根据果实成熟的特点，可将果实分为呼吸跃变型果实和非呼吸跃变型果实两类。以往研究表明，呼吸跃变型果实的发育和成熟主要是由乙烯调控的，而非呼吸跃变型果实发育和成熟调控机理的研究则相对进展缓慢。 草莓（Fragaria X ananassa Duch），属于蔷薇科草莓属多年生植物，其果实是典型的非呼吸跃变型果实，随着二倍体草莓全基因组序列的揭示，其体积小、生长周期短、遗传转化简便等优势，使得草莓日益成为非呼吸跃变型果实成熟和品质形成调控机理研究的热门试材。 蔗糖非酵解型蛋白磷酸酶家族SnRK2家族是一类植物特有的蛋白激酶，模式植物中的研究证明SnRK2s广泛参与了植物对高温、干旱、渗透胁迫等逆境的响应。申请人前期研究表明，蔗糖非酵解型蛋白磷酸酶家族SnRK2家族与草莓果实成熟和品质形成密切相关。其中，SnRK2亚家族III具体成员FaSnRK2.6可以在转录水平响应ABA信号和温度信号，对草莓果实发育和成熟进行负调控。但到目前为止，其他SnRK2家族成员在草莓果实成熟和具体品质指标形成中的作用尚不清楚。为此，本研究拟依托实验室前期研究基础，利用果实瞬时基因表达技术体系，对其中的3个具体成员在草莓果实成熟和品质形成中的作用进行研究分析，为后续深入的机理解析奠定基础。 二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法) 本研究实施计划及方案主要由以下三个环节组成： 查阅文献阶段。 围绕本研究的相关研究内容，进行相关文献查阅，节旨在帮助学生掌握文献查阅的相关技能，并充分理解本研究的研究目的和研究方案设计。 考核方式：是否能够充分理解研究背景、研究目的以及关键技术环节原理。 试验实施阶段。 该阶段共分为三个部分，三个部分彼此联系，逐步深入，构成现代分子生物学中利用瞬时基因表达技术对果实成熟和品质调控相关基因进行基因功能分析的基本研究方案。通过该研究的相关工作项目参与学生能够养成良好的实验习惯，切实掌握分子生物学操作的基本实验技术，学会利用瞬时基因表达技术进行成熟相关基因功能分析，为后续学习或深造奠定工作基础。 （1）FaSnRK2 家族成员在草莓果实中的基因超表达和基因沉默 利用本实验室前期建立的草莓果实瞬时基因表达技术体系，采用农杆菌介导的瞬时转化技术，在八倍体草莓‘红颜’果实中对SnRK2家族候选成员进行超表达和基因沉默。 （2）瞬时转化果实基因表达分析 将转化果实提取RNA，利用基因表达分析技术RT-PCR，对SnRK2家族成员的表达进行分析，鉴定在转化材料中是否成功实现了SnRK2基因的超表达或基因沉默。 （3） 瞬时转化果实成熟期和品质指标分析 以转化空载体的果实为对照，对瞬时转化成功的SnRK2-OE、SnRK2-RNAi果实进行成熟期观察，对糖、酸、花青素等品质指标含量变化进行HPLC定量分析。 考核方式：获得瞬时转化材料，完成品质指标分析。 结题报告撰写和PPT制作 学习如何进行试验数据分析，图表制作，以及如何撰写科学研究结题报告和汇报PPT。该环节旨在培养学生掌握正确分析试验数据，得出试验结论的能力。 考核方式：提交结题报告和汇报PPT。 三、实施基础和条件 申请人的研究工作围绕果实发育和成熟的信号转导机制，尤其是蛋白激酶等信号蛋白在草莓果实发育和成熟机理的信号转导机制研究展开的。目前，已经成功建立信号蛋白在草莓果实成熟和品质形成调控中的相关研究技术体系，能够确保该研究顺利、高效地开展。 申请人所在实验室多年来一直从事课题相关内容的研究，实验室拥有项目研究所需的各种常规生理、生化和分子生物学试验的实验设备和实验条件，能够确保本项目顺利进行。同时项目申请人所在果树系依托中国农业大学果树重点学科平台实验室，