共表达磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和烟酸转磷酸核糖激酶-生物加工过程.PDFVIP

第 １３卷第 １期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１３ Ｎｏ１ ２０１５年１月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊａｎ２０１５ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１５０１００４ 共表达磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和烟酸转磷酸 核糖激酶提高重组大肠杆菌发酵木糖产丁二酸 陈　 旭，梁丽亚，刘嵘明，万　 青，吴明科，姜　 岷 （南京工业大学 生物与制药工程学院 材料化学工程国家重点实验室，江苏 南京 ２１０００９） 摘　 要：野生型Ｅｃｏｌｉ Ｋ１２能够在厌氧条件下代谢木糖生长，但是丁二酸不是其主要的代谢终产物。 而在Ｅｃｏｌｉ ＢＡ２０３（ΔｌｄｈＡ，ΔｐｆｌＢ，Δｐｐｃ）中，通过过量表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶（ＰＣＫ），即Ｅｃｏｌｉ ＢＡ２０４，使其能够在厌氧 条件下利用木糖发酵生产丁二酸。 为了进一步提高生物量及丁二酸的产量，通过过量表达烟酸转磷酸核糖激酶 （ＮＡＰＲＴａｓｅ）提高ＮＡＤ（Ｈ）的生成，从而提高木糖代谢速率。 因此采用２种方法构建了共表达烟酸转磷酸核糖激 酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶的基因工程菌，即Ｅｃｏｌｉ ＢＡ２０８（ＢＡ２０３／ ｐＴｒｃ９９ａ ｐｎｃＢ ｐｃｋ）和 Ｅｃｏｌｉ ＢＡ２０９ （ＢＡ２０３／ ｐＴｒｃ９９ａ ｐｃｋ ｔｒｃ ｐｎｃＢ）。 通过实验发现：厌氧发酵７２ ｈ，ＢＡ２０９ 消耗 １６７ ｇ／ Ｌ木糖，生成１５８ｇ／ Ｌ丁二 酸，乙酸含量有所降低，而丙酮酸的量几乎不变。 ＢＡ２０９ 中ＮＡＤ（Ｈ）总量和ＡＴＰ含量较ＢＡ２０８和ＢＡ２０４都有明显 的提高。 这为考察ＮＡＤ（Ｈ）和ＡＴＰ ２种辅因子对重组大肠杆菌利用木糖合成丁二酸的影响提供了研究平台。 关键词：磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶；烟酸转磷酸核糖激酶；大肠杆菌；丁二酸；木糖 － － － 中图分类号：ＴＱ９２１　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１５）０１ ００１７ ０４ Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｓｕｃｃｉｎａｔｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｘｙｌｏｓｅ ｂｙ ｃｏ⁃ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ⁃ａｃｉｄ ｐｈｏｓｐｈｏｎｂｏｓｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ ｉｎ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＣＨＥＮ Ｘｕ，ＬＩＡＮＧ Ｌｉｙａ，ＬＩＵ Ｒｏｎｇｍｉｎｇ，ＷＡＮ Ｑｉｎｇ，ＷＵ Ｍｉｎｇｋｅ，ＪＩＡＮＧ Ｍｉｎ （Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ⁃Ｏｒｉｅｎｔｅｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｔｅｃｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＷｉｌｄＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ Ｋ１２ｃａｎｕｓｅｘｙｌｏｓｅｔｏｇｒｏｗｕｎｄｅｒａｎａｅｒｏｂｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｂｕｔ ｓｕｃｃｉｎａｔｅｉｓｎｏｔ ｔｈｅ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔＷｅ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ （ＰＣＫ）ｉｎＥｃｏｌｉ ＢＡ２０３，ａ ｌｄｈＡ，ｐｆｌＢ，ａｎｄｐｐｃ ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｓｔｒａｉｎ，ｎａｍｅｄ Ｅｃｏｌｉ ＢＡ２０４Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎ ｃｏｕｌｄ ｕｓｅ ｘｙｌｏｓｅ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｓｕｃｃｉｎａｔｅｕｎｄｅｒ ａｎ