高效毛细管电泳离氨基酸.pptVIP

毛细管电泳capillary electrophoresis (CE) 1.1 概述（generalization） 1.2 经典电泳分析 1.3 高效毛细管电泳分析 高效毛细管电泳的优势 侧面/横截面比的增大使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加。 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱，理论塔板数高达105～106板/米，毛细管凝胶电泳可以达到107。 微量：进样量只需1～50nl。 快速：几十秒到几十分钟就能完成分离。 广泛：样品范围可包括无机离子、氨基酸、蛋白质，甚至整个细胞。 高效毛细管电泳的应用 2.1 电渗现象electroosmosis 当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种定域电荷，因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成高出溶液本体的“自由”离子，即形成双电层，二者之间存在电位差。 在液体两端施加电压时，由于定域电荷无法移动，而双电层中的“自由”离子在电泳过程中通过碰撞等作用给溶剂分子施加单向推力，使之同向运动，并通过粘滞阻力带动周围溶剂运动，从而发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。 2.2 高效毛细管电泳中的电渗流 以毛细管空管电泳为例，在高电场的作用下，管壁硅醇基电离，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，由于这些阳离子实际上是溶剂化的，受液体黏度的阻力作用，引起柱中的溶液整体向负极移动，形成电渗流。 2.3 HPLC与HPCE的流形比较 HPLC压力驱动：溶液流动为层流，抛物线流型，管壁处流速为零，管中心处的速度为平均速度的2倍。 HPCE电场驱动：电荷均匀分布，整体移动，电渗流的流动为平流，塞式流动，谱带展宽较小，分离效率高。 2.4 高效毛细管电泳电渗流的作用 电渗流的速度约等于一般离子电泳速度的5～7倍； 各种电性离子在毛细管柱中的迁移速度为： ν+ =ν电渗流 + ν电泳 阳离子运动方向与电渗流一致； ν- =ν电渗流 – ν电泳 阴离子运动方向与电渗流相反； ν0 =ν电渗流 中性粒子运动方向与电渗流一致； （1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； （2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性； （3）电渗流的微小变化影响结果的重现性； 基于各被测物净电荷与质量比存在差异。不同离子表面电荷密度的差异使其以不同的速度在电解质中移动，最后达到分离。 3.1 高效毛细管电泳仪 3.2 毛细管的结构 3.4 示例 该例中管壁定域电荷呈电正性，电渗流方向为负极流向正极。 出峰顺序为：负离子——中性粒子——正离子； 带相同电性情况下，荷质比较大的离子先出峰。 3.5 分离度计算 4 姚老师的课题——毛细管电色谱分离手性化合物 毛细管电色谱兼具HPCE的高效性和HPLC固定相具有高选择性的特点； 分类：开管柱、填充柱、整体柱； 5 习题 请用电渗的原理确定推测本实验中两个样品的出峰顺序。（四） 请以本实验为例列举两种色谱定性方法。(十) 请举出两种常用的色谱定量的方法。(十二） 查阅文献，请举一毛细管电泳具体应用的实例。(九) 若在本实验的缓冲液中分别加入十二烷基三甲基溴化铵（阳离子表面活性剂），或十二烷基磺酸钠（阴离子表面活性剂），请推测电渗流的大小和方向以及样品的出峰顺序会产生何种变化，为什么。(七) 若在本实验的缓冲液中加入有机溶剂甲醇，请推测电渗流会产生何种变化，为什么。 若提高本实验的缓冲液中的磷酸二氢钠的浓度，请推测电渗流会产生何种变化，并且此变化会对样品的检测产生何种影响？(五) 请解释下列名词：电泳、电渗（双电层、定域电荷）、淌度。(第六组) 若将本实验的缓冲液改成壳聚糖－乙酸缓冲液（壳聚糖在电解液中带正电），请推测电渗流和出峰顺序会产生何种变化？(第八组) 请简述样品在毛细管电泳中的分离原理。 查阅文献，请简述毛细管电泳中样品的分离会受到那些因素的影响及如何影响（2～3点即可）。(一) 查阅文献，请简述毛细管整体柱(电色谱)的制柱方法（1种即可）(11)。 * * 在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 - + + - ++ -- 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、