血清铁及总铁结合力测定——亚铁嗪比色法.PDFVIP

授课对象：11 级检验1-5 班 课 时：2 学时 血清铁及总铁结合力测定 ——亚铁嗪比色法 【实验目的】 1．掌握亚铁嗪比色法测定血清铁的原理及注意事项 2．规范地进行血清铁测定 3．了解血清铁测定的主要临床意义 【实验用品】 722 型分光光度计，离心机，轻质MgCO3 粉末，甘氨酸/盐酸缓冲液，铁标 准应用液，血清 【实验原理】 血清铁和运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，在 被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在波长 562nm 处有一 吸收峰，与同样处理的标准液比较，即可求得血清铁含量。直接测定法应纠正血 清本身的色度，故应设血清空白。 总铁结合力 （TIBC ）是指血清中的运铁蛋白全部与铁饱和。将铁标准液加 到血清中，使之与未带铁的运铁蛋白结合成复合物，多余的铁被轻质碳酸美粉末 吸附除去，然后测定血清中的总铁含量，即为血清总铁结合力。 【操作步骤】 1．血清铁直接测定法 血清铁操作步骤 加入物 / ml 测定管 标准管 空白管 血清 0.45 — — 35.8μmol/L 铁标准应用液 — 0.45 — 去离子水 — — 0.45 甘氨酸-盐酸缓冲液 1.2 1.2 1.2 将各管混匀，以562nm 波长比色，空白管调零，读取测定管的吸光度 （称 血清空白）。然后再向各管加入亚铁嗪显色液 0.05ml，充分混匀，1 小时后仍以 562nm 波长比色，空白管调零，读取各管的吸光度。 【计算】 A U (血清A B × 0.97) 血清铁 （μmol / L ）＝ × 35.8(μmol / L) A S 由于两次测吸光度时溶液体积不同，故应将血清空白管吸光度乘以0.97 ，作 为校正。 2．血清总铁结合力测定法 于一具塞试管中加入血清 0.45ml ，铁标准液 （Fe179μmol/L ）0.25ml 和去离子水0.2ml，混匀，放置试温 10 分钟后，加碳酸 镁粉末约20mg ，再放 10 分钟，振摇数次，随后经2500r/min 离心 10 分钟，上 清液备用。另取3 支试管，按下表操作。 血清总铁结合力测定操作步骤 加入物 （ml ） 测定管 标准管 空白管 上清液 0.45 — — 35.8μmol/L 铁标准应用液 — 0.45 — 去离子水 — — 0.45 甘氨酸-盐