细胞因子及ELISA试剂盒.PDF

第一章 细胞因子及ELISA试剂盒 一、一、 细胞因子及其检测方法简介细胞因子及其检测方法简介 一一、、 细胞因子及其检测方法简介细胞因子及其检测方法简介 细胞因子是一类由免疫细胞和某些基质细胞分泌的低分子量糖蛋白。它参与调节机体免疫反应、生血造血功能、细胞与细 胞间的交流以及宿主对感染、炎症的反应等等。目前已确认的细胞因子达60余种，根据其功能不同可分为以下三类：一类是与 去除细胞内感染有关的Th1细胞因子，比如IL-2、IFN-γ、IL-12、TNF-α ；另一类是参与抗体介导的免疫反应的Th2细胞因子，IL-3、 IL-4、IL-5、IL-13是其中的代表；还有一类就是调控因子Th3 ，它参与维持机体微环境的平衡与稳定，比如IL-10和TGF-β等。这 些分类反映了细胞因子功能的多极化。 各种细胞因子都在复杂而又精细的网络中发挥各自的功能。一方面，一种细胞因子可以有多种生物学活性，它通过结合细 胞表面特异性受体，激活胞内相应的信号传导通路，诱导细胞合成新的RNA 和蛋白质。另一方面不同的细胞因子有许多相同的 生物学活性，使得单个细胞对不同的细胞因子呈现出相同的生物学反应。而且细胞因子与细胞因子之间相互影响、相互作用， 通过自分泌或旁分泌等形式构成网络调节。 在正常生理条件下，组织和体液中的细胞因子含量极低。在病理条件下，细胞因子含量发生改变，一般以升高为主，它标 志着与疾病发生、发展相关细胞因子通路的激活。疾病相关性的细胞因子水平的升高提示拮抗细胞因子的生物学活性为疾病治 疗提供可能。所以检测不同疾病患者细胞、组织和体液中细胞因子的含量能为疾病监测和治疗提供有力支持。 细胞因子的检测方法多种多样，一般分为生物学、分子生物学、免疫学（包括酶免、免疫组织化学技术、ELIspot、流式细 胞术等）三大类。 生物学测定法的原理是根据细胞因子特定的生物学活性，应用相应的指示系统，如各种依赖性细胞株或靶细胞，同时与标 准品对比测定，从而得知样品中细胞因子的活性水平，一般以活性单位（U/mg ）表示。生物学测定比较耗时耗力，所以它主要 用来评价细胞因子的功能，而不是进行常规细胞因子检测的手段。分子生物学方法有RT-PCR、核酸酶保护分析（RPA ）、Northern Blot和原位杂交（ISH ）。应用这些方法时，避免RNA降解是试验成功的关键所在。 细胞因子检测更多的是使用免疫学方法，其基本原理是将细胞因子作为抗原，用针对该抗原的特异性抗体进行定量或者定 性的检测。酶联免疫吸附实验（ELISA ）由于具有特异、灵敏、快速 、方便 、操作简单、价格便宜等诸多优点而成为细胞因子免 疫学检测法中最广泛应用的一种。免疫组织化学（IH ）或免疫细胞化学（I ），是一种对相应抗原进行定性、定位、定量测定 的技术。它把免疫反应的特异性和组织化学的可见性巧妙地结合起来，借助显微镜的显像和放大作用，在细胞、亚细胞水平定 位检测各种抗原物质，定位是应用该技术的独特优点 。 在单个细胞产生细胞因子的测定法中，目前得到最广泛应用的是酶联免疫斑点试验（ELISpot ），它的原理是先将抗细胞因子 抗体包被 相载体，再加入不同来源的细胞，待细胞分泌细胞因子后洗去细胞，然后加入相应的酶标抗细胞因子抗体，即可通 过与底物显色反应的深浅测定结合在 相载体上的细胞因子量，并可在光镜下观察分泌细胞因子的细胞。 流式细胞术是用来检测单个细胞内细胞因子的另一种无与伦比的技术。它能快速 、精确地测量通过检测区液流中的各种粒 子，如细胞、大分子、乳胶滴或其他粒子，从而实现对单细胞的定量分析和分选。建立良好的细胞通透性是有效检测细胞内细 胞因子的必要前提条件。成功染色胞内的细胞因子需要三个条件：① 蛋白转运抑制剂如monensin ；② 适当的细胞穿孔和蛋白 质 定；③能与 定的细胞因子结合的特异性抗体。 二、二、细胞因子蛋白细胞因子蛋白 （现货供应（现货供应 ）） 二二、、细胞因子蛋白细胞因子蛋白 （（现货供应现货供应 ）） 其它细胞因子需订货