菜鸟第一次对HPLC进行的维修最近我们试验室的HPLC液相坏了.PDFVIP

菜鸟第一次对HPLC 进行的维修 最近我们实验室的HPLC 液相坏了，关键问题有两个，第一个是检测器的响 应值不高，第二个问题是在走梯度的时候，色谱柱压很不稳。然而用一个泵走等 度的时候，柱压还OK，当用两个泵走等度时，柱压就很不稳，更不用说走梯度 了，根本没法使用，柱压不稳，基线也不平。在排除了柱子与流动相的问题以后， 初步估计是液相的二元泵出了问题。在向老师反应问题后，根据老师的指点，我 对泵进行了一个排查，下面简述一下我的排查过程： 首先介绍下出问题的仪器HPLC-ELSD 1）ELSD 检测器响应值不高，初步估计是检测器脏了，若要进行检测器彻底的 清洗，需要专业的工程师，我们采用的方法是将检测器漂移管温度设为100℃， 用色谱纯甲醇进行冲洗24h-48h ，在进行两天两夜的冲洗以后，响应值确实有 所提高。 2 ）下面关键是对泵的问题的排查。 在使用硅胶柱，正己烷做流动相，仅开B 泵，流速1ml/min 时，色谱柱柱压 为756 且柱压稳定。然而当仅开A 泵，流速1ml/min 时，色谱柱柱压为424 ， 且柱压不稳定（所用的流动相都是正己烷）。刚开始以为是B 泵堵了，因此 柱压较高。将B 泵的滤头，以及泵内的四个单向阀都拆下来进行清洗（用10% 的色谱纯甲醇，超声30min ）。超声结束后装上单向阀（注意：单向阀上有 箭头标志，在安装时，箭头要始终朝上）。在经过清洗以后，结果发现还是 老样子，这就纳闷了是怎么回事呢？难道是A 泵出了问题？ 单向阀（每个泵有 四个单向阀  单向阀  （滤头） 3 ）检查A 泵 对A 泵进行检查，发现A 泵的流速达不到1ml/min，此外，柱压很不稳定， 与B 泵比明显偏小，初步估测可能是A 泵的单向阀出了问题。但A 泵有四 个单向阀，如果将四个单向阀都进行更换，成本还是相当高的，但若可以确 定哪个单向阀出现问题，进行有针对性的更换，那就可以大大减少成本了。 当然，你把四个单向阀按照顺序逐个拆下来，进行排查，最终是可以判定到 底是哪个单向阀出问题的，但是这样比较耗时，若运气好，第一个就是坏的， 你刚换上就OK 了，那大工就告成了。但若运气不好，换到第四个才发现问 题，那还是蛮悲剧的。现在我向大家介绍一个小技巧，可以使效率提高一倍。 在泵运行时，在图中白色的点出来的时候用手按住（见五角星处），同时眼 睛关注柱压，若在手按住的同时柱压升高，那基本可以判定这两个单向阀没 问题，若柱压降低，那很有可能问题就是出在这两个单向阀里面啦，我就是 用这种方式排查的，结果是A 泵左上的那个单向阀出的问题，更换以后就好 了。 4 ）在更换好坏了的单向阀以后，用正己烷作为流动相，分别开两个泵，柱压可 以保持稳定，且A 泵的流速也正常了是1ml/min，走等度与走梯度都没有问 题了。折腾了一天就折腾好了，现在我们实验室的HPLC 运行的还是很不错 的。以上是我总结的小小的关于HPLC 清洗维修的一点小经验，初来乍到， 还不是很懂，若有说的不对的地方，希望大家多多指正，至于为什么用手按 住，柱压降低就表示问题出在这两个单向阀内，原理我不是很清楚，若有知 道的同学可以解释下啊，呵呵~~~