甜菜M14品系BvM14-STPK蛋白激酶在原核.PDFVIP

中国农学通报 2019,35(3):58-61 Chinese Agricultural Science Bulletin 甜菜M14品系BvM14-STPK蛋白激酶在原核 表达系统中的低温诱导表达及纯化 1,2 1,2 1,2 于 冰 ，刘 祥 ，李海英 1 （黑龙江大学农业微生物技术教育部工程研究中心，哈尔滨150500； 2 黑龙江大学生命科学学院，黑龙江省普通高校分子生物学重点实验室，哈尔滨150080） 摘 要：为获得纯化的BvM 14-STPK 蛋白激酶，采用低温16℃，0.5 mmol/L IPTG 对转BvM 14-STPK 的大 肠杆菌进行诱导，利用Ni2+ 亲和层析技术对菌液上清进行纯化，并利用SDS对纯化蛋白进行检 测。结果表明37℃，0.5 mmol/L IPTG 诱导后，BvM 14-STPK 蛋白以包涵体形式存在，不能对目的蛋白进 行纯化分析研究；通过优化诱导条件，在低温16℃，0.5 mmol/L IPTG 过夜诱导，在上清中获得大量 BvM 14-STPK 可溶性目的蛋白，对菌液上清纯化并经SDS检测到BvM 14-STPK 目的蛋白。在目 的蛋白纯化过程中，发现150 mmol/L 咪唑洗脱液纯化BvM 14-STPK 目的蛋白效果最好。本研究成功纯 化出目的蛋白BvM 14-STPK。 关键词：甜菜M 14品系；BvM 14-STPK ；低温诱导；纯化 中图分类号：S566.3 文献标志码：A 论文编号：cas LowTemperatureInducedExpressionandPurificationofBvM14-STPKProteinKinasefromSugar BeetM14LineinProkaryoticExpressionSystem 1,2 1,2 1,2 YuBing ,LiuXiang ,LiHaiying (EngineeringResearchCenterofAgriculturalMicrobiologyTechnology,MinistryofEducation,HeilongjiangUniversity,Harbin1 150500; KeyLaboratoryofMolecularBiology,CollegeofHeilongjiangProvince,SchoolofLifeSciences,HeilongjiangUniversity,2 Harbin150080) Abstract: ToobtainthepurifiedproteinkinaseBvM14-STPK,E.colitransformedwith BvM14-STPK was inducedundertheconditionoflowtemperature 16℃and0.5mmol/LIPTGinthisstudy.Andthesupernatant 2+ ofthebacteriumsolutionwaspurifiedbyNi affinitychromatography.Furthermore,SDSwasapplied todetectthepurifiedprotein.TheresultsshowedthatBvM14-STPKproteinexistedinthe