人教版高中生物选修1 多聚酶链式反应扩增dna片段 名师公开课省级获奖课件（37张）.ppt

5 3 5 3 引物2 5 3 引物1 5 3 …………………………………………………… 72℃延伸子链 5 3 5 3 引物2 5 3 引物1 5 3 DNA聚合酶 DNA聚合酶 3 3 5 3 5 3 5 3 …………………………………………………… 5 3 5 5 3 5 3 5 3 第二轮 3 3 3 3 5 5 5 PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸 循环次数 DNA数量 1 2 2 4 3 8 20 1,048,576 30 1,073,741,824 30次循环后一个靶序列扩增的数量 三、 PCR 的实验操作 1、PCR仪 （一）设备及用具 实质上一台能够自动调控温度的仪器 2、微量离心管 一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml 3、微量移液器 用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次 PCR仪 微量离心管 微量移液器 一次性吸液枪头 循环数 变性 复性 延伸 第一次 94°C，10min － － 30次 ９4℃，30s 55℃，30s 72℃，1min 最后一次 ９4℃，1min 55℃，30s 72℃，1min 六、 课题延伸 例如：PCR产物每轮循环增加一倍，30轮循环扩增量达230个拷贝（109拷贝） PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出特点 实验小结 PCR仪加热使（ ）变性, 复性使引物与模板DNA（ ）,延伸需将反应温度升至中温( ),在（ ）的作用下,以 （ ）为原料,以（ ）为复制的起点,合成新链。 如此重复改变反应温度,经（ ）三个阶段为一个循环 模板 互补 Taq聚合酶 四种脱氧核苷酸 引物 变性、复性和延伸 72℃ 湖南长郡卫星远程学校 2009年下学期 制作 03 温故知新1 组成DNA分子的基本单位是什么? 这些基本单位是如何连接成DNA分子的? DNA分子结构有什么特点？ 一、基础知识 脱氧 核糖 含氮碱基 磷酸 O 1 2 3 4 5 A T G C 脱氧 核糖 A 磷酸 腺嘌呤脱氧核糖核苷酸 O 脱氧 核糖 G 磷酸 鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸 O 脱氧 核糖 T 磷酸 胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸 O 脱氧 核糖 C 磷酸 胞嘧啶脱氧核糖核苷酸 O 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 磷酸酯键 5端 3端 5端 3端 O O 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 脱氧 核糖 碱基 磷酸 OH 3 O O O O DNA的方向：通常将DNA的游离的羟基末端（-OH）称为3端，而游离的磷酸基团的末端称为5端。 DNA分子的复制过程是怎样的？ DNA分子的复制需要哪些条件？ 温故知新2 补充知识 1、DNA聚合酶的特点： 不能从头合成DNA，只能从3端延伸DNA，因此DNA复制需要引物，为DNA聚合酶提供3端 ACGCTAGTGCGCCCGGTTACG 5 3 TGCGATCACGCGGGCCAATGC 5 3 3 ACGCU RNA引物2 5 AAUGC RNA引物1 5 3 3 3 复制方向：沿模板，从子链的5向3端延伸 方向 方向 引物：是一小段DNA或RNA，它能与DNA母链一段碱基序列碱基互补配对，用于PCR的引物长度通常为20-30个核苷酸 补充知识 2、DNA的半不连续复制 解旋酶 DNA单链结合蛋白 二、PCR 技术 DNA模板 DNA聚合酶 两种引物 四种脱氧核糖核苷酸 1、原理：体外模拟细胞内DNA的复制 另外，PCR技术需要在一定的缓冲溶液中才能进行 2、模拟细胞内DNA的复制面临的首要问题是： DNA双链如何解开，如何保持单链状态？ 细胞内复制DNA用的是解旋酶使得双链打开，然后DNA单链结合蛋白与解开的单链结合，使单链状态得以保持。 PCR技术利用的是DNA的热变性和复性原理 DNA双链 单链 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物Ⅰ和引物Ⅱ与两条单链的结合 DNA 分子的热变性原理： 变性（加热80-100℃） 3、PCR反应的过程 5 5 3 3 5 3 5 3 95℃变性 5 3 5 3 …………………………………………………… 降低温度复性55℃ 5 3 5 3 5 3 引物1 5 3 引物