浓度测定PAGE电泳及WesternBlot.DOC

实验五、六 蛋白制备、浓度测定、PAGE电泳及Western Blot 每组准备（共10组） HL60细胞×1瓶 滴管×6 刻度移液管5 ml×3; 10 ml×5 15 ml离心管×3及离心管架 1.5 ml 离心管×10及离心管架 20 ul、100 ul、1000 ul 枪头及枪 垂直电泳槽及配胶系统1套 美工刀、直尺、一次性手套×2、混匀板、剪刀、鸭嘴镊、胶布 配胶用小烧杯×2 废液桶、废液盆、记号笔、吸耳球 10 ml、100 ml量筒; 玻璃平皿 ×5 PVDF膜、厚滤纸(2.5×5.2cm)× 1×PBS ×12 ml 30％ 丙烯酰胺溶液 ×13 ml 4×分离胶缓冲液 ×8.5 ml 4×浓缩胶缓冲液 ×3.5 ml 10％ SDS ×0.6 ml 10％ 过硫酸铵 ×300 ul（提前1天配制并分装，4℃ ddH2O ×20 ml 4%SDS ×0.6 ml 4×加样缓冲液 ×20 ul 1×SDS电泳缓冲液 ×500 ml 水饱和正丁醇 ×1.5 ml 转移缓冲液 ×85 ml(需准确) 封闭液 ×50 ml（提前1天配制并分装，4℃ PBST ×150 ml 检测缓冲液（即缓冲液3） ×20 ml 其中，28－29第二周放 全班共用 洗涤用蒸馏水1桶放水池边 预染色蛋白Marker 塑料袋若干（放讲台上） 甲醇 ×2瓶 TEMED ×2瓶 考马斯亮蓝染色液 脱色液I 脱色液II 一抗：兔抗人c-Myc多克隆抗体 二抗：AP标记的羊抗兔IgG抗体 显色底物：NBT/BCIP ddH2O水洗瓶 备用试剂、器材若干 仪器 低温高速1.5 ml离心机 室温高速1.5 ml离心机 低温低速15 ml离心机 沸水浴（内有1.5ml离心管的水漂） 电泳仪 ×3 半干转移电泳槽 ×2 摇床 ×2（上铺报纸） 封口机 漩涡振荡器