改良3′cDNA末端快速扩增PCR法筛选扇贝抗菌肽基因.PDF

现代药物与临床 Drugs Clinic 第 26 卷 第 5 期 2011 年 9 月 • 393 • 改良 3′ cDNA 末端快速扩增 PCR 法筛选扇贝抗菌肽基因 1, 2 2 1, 2* 1, 2* 梁爱玲 ，刘勇军 ，侯 敢 ，黄迪南 1. 广东医学院 检验医学研究所，广东 东莞 523808 2. 广东医学院 生物化学与分子生物学研究所，广东 东莞 523808 摘 要：目的 应用改良 3′ cDNA 末端快速扩增 PCR 法（rapid amplification of cDNA ends ，RACE ）筛选扇贝抗菌肽基因。 方法 设计 M13 和 T7 启动子分别修饰的基因特异性引物（gene special primer，GSP ）、锚定引物，提取扇贝血淋巴总RNA 进行改良 3′ RACE 和 5′ RACE ，获得 cDNA 准全长序列并在 GenBank 中进行同源性比较。结果 从扇贝血淋巴中获得 3 个 cDNA 的 3′端序列基因和 1 个准全长 cDNA （544 bp ），在 GenBank 中未发现与之高度同源的基因。结论 从扇贝血淋巴中 获得的 1 个准全长 cDNA、3 个 cDNA 的 3′端序列可能属于新基因。应用改良 3′ RACE 能钓取含抗菌肽保守序列的新基因片 段，该方法可行。 关键词：扇贝；抗菌肽；3′ cDNA 末端快速扩增 PCR 法；基因 中图分类号：R915 ；R944 文献标志码：A 文章编号：1674 - 5515(2011)05 - 0393 - 04 Screening for antimicrobial peptide genes in scallop by improved PCR method of rapid amplification of 3′ cDNA ends 1, 2 2 1, 2 1,2 LIANG Ai-ling , LIU Yong-jun , HOU Gan , HUANG Di-nan 1. Institute of Laboratory of Medicine, Guangdong Medical College, Dongguan 523808, China 2. Institute of Biochemistry and Molecular Biology, Guangdong Medical College, Dongguan 523808, China Abstract: Objective To screen antimicrobial peptide genes from scallop with improved PCR method of 3′ rapid amplification of cDNA ends (RACE). Methods Gene special primers and anchor primers modified by promoters M13 and T7 were designed. Total RNA was extracted from scallop and amplified by improved PCR method of 3′ RACE and 5′ RACE to obtain the full-length cDNA of antimicrobial peptide genes. The homology of the sub-full-length cDNA sequence was blasted in GenBank. Results Three 3′ end cDNA sequences and one sub-full-length cDNA (544 bp) were obtained. There was no similar gene in homology in GenBank. Conclusion One sub-full-length cDNA and