采用新型HILIC色谱柱实现快速N连接糖基化分析-Agilent.PDF

采用新型 色谱柱实现快速 连接 HILIC N 糖基化分析 应用简报 生物制药 作者 言 James Martosella、Oscar Potter、 重组单克隆抗体治疗药物(mAb) 是最大的一组治疗性蛋白药物。此类治疗性药物的有效 Danny Mancheno 和Jia Liu 性高度依赖于 mAb 正确的糖基化模式，且迄今为止，所有批准的治疗性 mAb 均为免疫 安捷伦科技有限公司 球蛋白 。人类 的每个重链上均含有一个保守的 连接糖基化位点 。 G (IgG) [1] IgG [2] 连接糖基化是一种极为重要且非常复杂的翻译后修饰，需要在糖蛋白药物开发、加工 和生产的每个阶段对其进行控制、监测与了解 。此外，治疗性蛋白的安全性、有效性 [3] 和血清半衰期等特性也会因糖基化模式的不同而受到影响。因此，糖基化模式分析是表 征治疗性糖蛋白 （尤其是 mAb）的一个重要部分。 虽然已有多种不同的方法用于糖基化分析。但是，大部分的方法均基于酶解蛋白，从 中释放多糖，然后通过标记试剂 （例如 氨基苯甲酰胺， ）进行进一步的衍生 mAb 2- 2-AB 化 。由于糖基缺少发色团，所以荧光检测前需先采用 （中性）标签标记。而由 [4] 2-A B 于标记后的多糖结构极为亲水，因此将亲水相互作用色谱 （通常称为HILIC）作为首选的 分离技术。采用配合荧光检测的 HILIC 分离是一种非常稳健的糖基化分析方法，同时 HILIC/LC 还可与质谱联用，以获得重要的质量及结构信息。 在本应用简报中，我们介绍了 AdvanceBio 糖谱分析色谱柱，这 结果与讨论 是一种亚2 µm HPLC 色谱柱，具有新型HILIC 酰胺化学技术，用 于高通量糖基化分析。与现有的 HPLC 色谱柱技术相比，该色谱 快速分离 柱及方法可增强多糖的分离，且减少了40% 的洗脱时间。为了 1.8 µm 粒径的AdvanceBio 糖谱分析 HILIC 色谱柱可提供极快的 释AdvanceBio 糖谱分析色谱柱的实用性，我们以2-A B 标记后 糖基化分析，整个分析可在 内完成 （图 和表 ）。表