高美华《医学免疫学》westernblot---zb-第三部分.pptVIP

下载本文档

0
0
约小于1千字
约 12页
2019-02-05 发布于湖北
举报
版权申诉

高美华《医学免疫学》westernblot---zb-第三部分.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

Western blot 实验技术;Western Blot基本原理; 一、实验原理 Western Blot法又称免疫印迹法（IBT），分三个阶段进行。第一阶段：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）。第二阶段：电转移。第三阶段：固相酶免疫测定。;;三、固相酶免疫测定检测ENA自身抗体; （一）原理;; （二）材料 1、洗涤液：含0.05％吐温-20的pH7.4的PBS 2、酶标抗人IgG 3、阴性对照血清、阳性对照血清 4、底物溶液 5、终止液 6、恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、滴管、吸管等。 ;; （三）方法 1．次日取出已封闭的NC膜，用洗涤液漂洗5次，每次1min。 2. 将剪下条带放入反应槽中，加入1ml洗涤液，再已加入20μl血清混匀，37℃恒温摇动40min。 3．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 4．加入1ml酶标羊抗人IgG，37℃恒温摇动30min。 5．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。 6．加入底物液1ml，显色10min。 7．加入终止液终止反应。 ;;结果判断用肉眼观察。出现染色条带为阳性，不出现染色条带为阴性，不同的疾病可以出现不同的条带。跟据条带位置判断结果。判断标准： 1．抗Sm抗体：同时出现29KD、28KD、13.5KD条带。 2．抗SSA抗体：60KD、52KD任意出现一条带。 3．抗SSB抗体：47KD、45KD应用时出现条带。 4．抗Jo-1抗体：55KD出现条带。 5．抗Scl-70抗体：同时出现86KD、67KD条带。