青蒿高产株系OO1法呢基焦磷酸合酶基因的克隆.PDF

第31卷第4期 河北农业大学学报 V01．31No．4 2008年7月 JOURNAL0FAGRICULJ’URALUNIVERSITY0FHEBEI 008 Jul．2 文章编号：1000—1573(2008)04一0071—05 青蒿高产株系OO1法呢基焦磷酸合酶基因的克隆、 原核表达及酶活性测定 韩军丽1’2， 李振秋2”， 叶和春2， 李国凤2 (1．天津市食品生物技术重点实验室，天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津300134； 2．中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室，北京100093； 3．河北大学生命科学学院，河北保定071002) 摘要：法呢基焦磷酸合酶(FPS)是治疗疟疾的特效药物——青蒿素生物合成途径的关键酶。运用RT—PCR方 法从青蒿高产株系00l中克隆法呢基焦磷酸合酶基因；构建His标签融合蛋白FPS表达载体，进行原核诱导表 达、蛋白纯化及酶活性测定的研究。结果表明：克隆的FPs基因和文献已报道的2个青蒿FPs基因编码的氨基 酸序列的同源性分别为98．83％和99．42％；原核诱导表达的His标签融合蛋白FPS的表达量高、可溶性好，具 有FPS酶活性。 关键词：法呢基焦磷酸合酶(FPS)；青蒿(Ar￡emis缸口玎竹懈L．)；基因克隆；原核表达；蛋白纯化 中图分类号：S651 文献标识码：A Molecular and cloning，prokaryoticexpression，enzymeactiVity from 00l assayof／．ps ArtPmZsZ口口n聆“口strain HANJun—Iil”，Ll YEHe—chun2，LI Zhen—qiu2”， Guo—fen92 ofF00d of andF00d of (1．TianjinKeyLaboratoryBiotechnology，collegeBiotechnologyscience，TianjinUniversity 3001 of andEnvimnmentalMolecular Cc粕merce，Tianjin34，China；2．KeyLaboratoryPhotosynthesis Physiology， IIlStituteof of 1 Botany，ChineseAcademysciences，Be巧ing00093。China； ofLife 3．College Sciences，Hebei 071002，Chim) UniverSity，Baoding a inthe ofarte- Abstract：Farnesyldiphosphatesynthase(FPS)iskeyenzymebiosyntheticpathway neweffectiveantimalarialthis wasclonedfromAr￡Pmis如口咒