褐藻胶裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及其酶学性质-食品与生物技术.PDF

褐藻胶裂解酶基因在大肠杆菌中的 表达及其酶学性质 ， ， ， 汪立平 刘玉佩 孙晓红 赵勇 　 　 　 （ ， ） 上海海洋大学食品学院 上海 ２０１３０６ ： ， ， 摘要 作者从蜡样芽孢杆菌 Ｆ１５１０中提取ＤＮＡ 通过 ＰＣＲ克隆得到褐藻胶裂解酶基因后 将 － － （ ） ， 其构建到 ＥＴ ３０ａ＋ 上并在大肠杆菌 ＢＬ２１菌株中进行高效诱导表达 继而对纯化得到的褐 ｐ － 。 ： 藻胶裂解酶蛋白进行活性检测和酶学特性研究 实验结果表明 ＰＣＲ扩增出 １０３５ｂ 大小的褐 ｐ 藻胶裂解酶基因 （ 登录号： ）， 电泳结果显示出相对分子质量 ａｌｌＧｅｎＢａｎｋ ＧＵ５８５５７５ ＳＤＳＰＡＧＥ ｇ － 。 ／ 约为４５０００的特异性蛋白质条带 表达条件优化实验结果表明 ０．４ ｍｍｏｌＬ 浓度的ＩＰＴＧ３２ 　 　 ， 。 ， 诱导 重组蛋白的表达量最高 约占菌体总蛋白质质量的 测定褐藻胶裂解酶酶活性 ℃ ４ｈ ３６％ ／ 。 ： ， ， 酶活力为 １１．７Ｕ ｍ 酶学性质研究表明 ＡＬＧＬ 的酶活最适温度为３５ ℃ 热稳定性较差 最 ｇ ， ２＋ 、 ２ ， ／ ， 适 值为 对酶活有激活作用 催化褐藻胶的 值为 Ｈ ６．６Ｃａ Ｍ ＡＬＧＬ Ｋ １．８９ｍ ｍＬ Ｖ ｐ ｇ ｍ ｇ ｍａｘ 为 ／ 。 １５．０１Ｕ ｍＬ ： ； ； 关键词 褐藻胶裂解酶 蜡样芽孢杆菌 原核表达 中图分类号： 文献标志码： 文章编号： （ ） Ｑ ７８ Ａ １６７３－１６８９２０１２０２－１８９－０６