费晓方《细胞生物学》14ch14细胞周期调控与癌细胞.pptVIP

细胞周期调控与癌细胞 * * 第14章 邹志华 zouzh@jlu.edu.cn G1期检验点、起始点、限制点 营养供给 生长信号 内在因素(cdc 基因) DNA复制是否完成？ 细胞生长是否足够？ 环境是否适合？ G2/M 检验点 中、后期过渡检验点 是否所有染色体都附着在纺锤体上？ 细胞周期主要检验点 第一节、细胞增殖调控 一、MPF的发现 M期Hela细胞与G1、S、G2期的Ptk细胞融合实验证明MPF的存在： MPF - 有丝分裂促进因子 (Mitosis-promoting factor) (卵细胞成熟促进因子）、（M期促进因子) G1期细单线状 S期粉末状 G2期双线染色体状 非洲爪蟾卵细胞成熟和卵裂过程 成熟卵细胞质移植实验 孕酮诱导卵母细胞成熟需要合成新蛋白质； 成熟卵细胞的细胞质诱导的成熟不需要合成新蛋白； 纯化的MPF含p32和p45两种蛋白； p32和p45结合后是一种蛋白激酶。 蟾卵细胞质移植实验证明MPF是蛋白激酶: Figure 17-6 Molecular Biology of the Cell (? Garland Science 2008) 二、 细胞分裂周期相关基因cdc的发现 对温度敏感性突变酵母的研究发现很多cdc 基因 (Cell Division Cycle Gene)： 酵母cdc2基因编码的 p34cdc2为蛋白激酶原 酵母p34cdc2 + 酵母p56cdc13 = 蛋白激酶，调控G1/S、G2/M转换 蟾卵MPF的p32 = 酵母p34cdc2 蟾卵MPF的p45 = 酵母p56cdc13 码？ 三、周期蛋白cyclin的发现 海胆细胞分裂的研究发现随细胞周期变化的蛋白- 周期蛋白 (cyclin)：在间期 累积，在分裂期消失 – 与MPF活性消长一致； cyclin B即是蟾卵MPF的p45 = 酵母的p56cdc13：调节亚单位，即周期蛋白 (cyclin) 而蟾卵MPF的p32 =酵母p34cdc2（酵母p34cdc28）是催化亚单位，即周期蛋白依赖性 蛋白激酶 (CDK, cyclin-dependent kinase) 周期蛋白 (cyclin) 是含cyclin box（周期蛋白框）的调节亚单位； 其含量随细胞周期进程变化而变化 (G1期周期蛋白、S期周期蛋白、M期周期蛋白等)； 不同的周期蛋白通过不同的周期蛋白框与不同的CDK结合； 不同的cyclin-CDK复合物决定细胞周期的不同阶段的进行； cyclin与CDK的结合是CDK激活的先决条件； CAK (CDK-activating kinase)、CKI (CDK inhibitor)等进一步调节cyclin-CDK的活性。 泛素依赖性降解 与CDK结合 降解序列 部分周期蛋白在细胞周期中的积累 A：哺乳细胞 B：芽殖酵母 C：裂殖酵母 四、催化亚单位CDK和CDK抑制因子 通过PCR发现的与cdc2同源的人CDK分子 蟾卵MPF的p32 = 酵母p34cdc2：催化亚单位，即CDK (周期蛋白依赖性蛋白激酶) CDK的特征： 1。CDK激酶结构域：与周期蛋白结合 2。磷酸化修饰位点：CAK和CKI The Major Cyclins and Cdks 不同的cyclin-CDK复合物决定细胞周期的不同阶段 五、细胞周期运转调控 一、G2/M期转化与CDK1的关键性调控作用 cyclin B1在CDK1活性调控中的作用 CDK1激酶活性的综合调控 CKI (CDK inhibitor) and Cdc25磷酸酶 CAK (CDK-activating kinase) M-Cdk的激活反馈调节 CKI和Cdc25磷酸酶活性 二、M周期蛋白与细胞分裂中-后期转换 Mad2 APCCdc20 导致securin降解和分裂酶活化 APCCdh1 Mediates the Destruction of M-cyclins (Cdh1) Cip/Kip家族：p21Cip/WAF1、p27Kip1、p57Kip2 INK4家族：p16、p15、p18、p19 三、CKI控制G1、G1/S、S期 SCF使CKI等泛素化后降解调节分裂间期 SCF (Skp, Cullin, F-box containing complex): multi-protein E3 ubiquitin ligase APC和SCF在细胞周期中的活性及其底物 The Major Cell-Cycle Regulatory Proteins p16 p21 p27 Wee1 Cdc25 DNA damage Differentiation