酶即失去其催化活性.PPTVIP

第二十五章 临床酶法分析的原理与方法 * 第六节 酶激活与酶抑制测定的原理与方法 一、酶激活测定法 通过特定机制使酶由无活性变为有活性或使酶活性增加的物质即称为酶的激活剂。 将酶中关键的金属离子、微量元素或辅酶去除之后，酶即失去其催化活性，无活性的酶与标本混合，标本中的金属离子、微量元素或辅酶使该酶重新复活，复活的比例可以反映这些金属离子、微量元素或辅酶的含量。 异柠檬酸脱氢酶法测定血清镁离子 异柠檬酸＋NADP α-酮戊二酸＋CO2＋NADPH＋H ICD＋Mg 2＋ 该法用EDTA和乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）两种金属螯合剂在适宜浓度下抑制钙离子，标本中镁离子通过恢复异柠檬酸脱氢酶（ICD）活性，催化异柠檬酸脱氢的正向反应，使NADP 还原，在340nm测定吸光度的增加，可测定镁离子浓度。 ＋ ＋ ＋ 碱性磷酸酶法测定锌离子 4-硝基酚磷酸 ＋ H2O 4-硝基酚 ＋ 磷酸盐 ALP＋Zn 在锌离子的激活下，ALP水解4-硝基酚磷酸生成4-硝基酚，通过检测405nm吸光度的上升速率，定量反映出样品中锌离子的含量。 该方法特异性高，不受样品中其他金属离子的影响，也不受内、外源物质的污染，测定结果精密度和准确度好。 二、酶抑制测定法 能够使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白构象发生非常显著变化的物质称为酶抑制剂。抑制剂能够和酶活性中心或对应区域结合，从而抑制酶的催化活性。 在检测的时候将待测物（抑制剂）加入反应体系，此时酶的活性被部分抑制，然后测定体系中剩余酶的活性，通过被抑制的酶的活性即可以计算出标本中待测物的含量。 有机磷的酶法测定 有机磷是乙酰胆碱酯酶的抑制剂，将标准乙酰胆碱酯酶与标本在37℃孵育10min，测定剩余的乙酰胆碱酯酶的活性，从被抑制的乙酰胆碱酯酶的活性可以计算出标本中有机磷的含量。 *