人类输卵管上皮永生化细胞系的建立及鉴定.PDFVIP

中国癌症杂志 2013年第23卷第4期 《 》 CHINA ONCOLOGY 2013 Vol.23 No.4 241 人类输卵管上皮永生化细胞系的建立 及鉴定 1,2 1 2 2 1 2 1 2 高雯 　臧荣余 　王雁 　杨丽娜 　刘杨 　亓子豪 　尹胜 　杨恭 1. 复旦大学附属肿瘤医院妇科，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032 ； 2. 复旦大学附属肿瘤医院实验研究中心，复旦大学上海医学院肿瘤学系，上海 200032 　　［摘要］　背景与目的：最近研究表明卵巢高级别浆液性癌可能起源于输卵管上皮。本课题通过基因沉默 和端粒酶导入技术将原代输卵管上皮细胞永生化，为以后建立恶性转化细胞系和卵巢癌动物模型奠定基础。方 法：分离并培养输卵管上皮细胞，导入p53和pRb shRNA结合hTERTcDNA，建立p53和pRb基因同时沉默并过表达 hTERT的永生化细胞系，并对永生化细胞系进行连续传代、沉默基因的蛋白质印迹法(Western blot)测定、SA- β-gal染色和非停泊生长实验及体内致瘤活性鉴定。结果：我们建立了稳定表达p53、pRbshRNA和hTERT的永生 化输卵管上皮细胞系：FTE248116/p53i+pRbi+hTERT及FTE312249/p53i+pRbi+hTERT。结论：可以通过导入端粒 酶基因及敲除抑癌基因p53和pRb来建立永生化细胞系,并有望于构建恶性转化细胞系和人类高级别浆液性卵巢 癌动物模型。 　　［关键词］　输卵管上皮细胞；p53；pRb；hTERT；永生化 　　DOI: 10.3969/j.issn.1007-3969.2013.04.00X 　　中图分类号：R737.32　　文献标志码：A　　文章编号：1007-3639(2013)04-0241-07 1,2 1 2 Immortalization of human fallopian tube epithelial cells GAO Wen , ZANG Rong-yu , WANG Yan , YANG Li-na2 1 2 1 2 , LIU Yang , QI Zi-hao , YIN Sheng , YANG Gong (1.Departements of Gynecological Oncology, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China; 2.Cancer Research Laboratory, Fudan University Shanghai Cancer Center, Department of Oncology, Shanghai Medical College, Fudan University, Shanghai 200032, China) Correspondence to: YANG Gong E-mail: yanggong@fudan.edu.cn 　　［Abstract ］ Background and purpose: Recent researches indicate that high grade serous ovarian carcinoma is derived