脐带间充质干细胞课件.ppt

脐带间充质干细胞 定义 脐带间充质干细胞（Mesnchymal Stem Cells，MSCs）是指存在于新生儿脐带组织中的一种多功能干细胞，它能分化成许多种组织细胞 。 表型特征： CD31-,CD34-,CD45-,CD44+,CD73+,CD90+,CD105+,HLA-DR- 特点与优势 脐带间充质干细胞（MSCs）具有较高的分化潜能，可向多个方向进行分化。它在骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、内皮和心肌等组织工程方面具有广阔的临床应用前景。从人脐带中分离出MSCs，细胞含量、增殖能力优于骨髓MSCs，免疫原性比骨髓MSCs低，并且具有取材方便，无伦理学争议等优点，因此越来越受到研究工作者们的关注。 培养方法 酶消化法 去除血管，将脐带组织剪成1~3cm大小组织块，用无血清培养基洗2次，将组织浸泡在0.1%胶原酶中，37℃消化4~6小时。加入生理盐水（消化液体积的2倍），2000r/min离心5min，弃上清，加入2.5%胰蛋白酶，37℃处理30min，加入生理盐水（消化液体积的2倍），100目滤网过滤，滤液2000r/min离心5min，弃上清。重复两次。细胞计数，将细胞调成一定浓度用于培养。 组织块贴壁法 取新鲜健康脐带，用PBS冲洗干净后，用剪刀镊子剔去血管，剥出里面的华通氏胶，将所得组织充分剪碎至1 mm^3大小，加入α-MEM培养液置于37℃，5%的CO2培养箱培养，培养液中含10% FBS，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素。脐带组织培养5-7天后，可见有部分细胞从组织块周围爬出，形态呈细小的梭形，一周后，细胞开始迅速增殖，形成大小不等的细胞集落。 脐带间充质干细胞扩增培养方法 采用无血清培养基（可含10%受者灭活血清）将细胞调成悬液，按2×10^4/cm^2接种于培养瓶， 37℃、5%的CO2条件下培养4d后全量换液，吸弃非贴壁细胞。每3d换液，细胞覆盖瓶底80%时，0.25%胰蛋白酶-1mmol/L EDTA消化，按1：3传代。培养3周左右，胰酶消化细胞，细胞悬液2000r/min离心5min，弃上清后加入生理盐水混匀，2000r/min离心5min，重复2次。 脐带间充质干细胞培养结果 新分离的脐带单个核细胞呈纺锤形 脐带间充质干细胞在临床上的应用 1.能具有较强的免疫调节作用，可用于治疗红斑狼疮和硬皮病等自身免疫性疾病，降低细胞或器官移植后的免疫排斥反应，提高细胞或器官移植的成功率。 2.能促进造血恢复功能，与单一造血干细胞移植比较，间充质干细胞和造血干细胞共移植能显著提高白血病和难治性贫血等疾病的治疗效果。 3.能修复损伤或病变的组织器官，用于治疗骨和肌肉衰退性疾病、心脑血管疾病、肝病、脑及脊髓神经损伤和老年痴呆等。 4.能在体内或体外通过生物因子定向诱导分化为神经细胞、胰岛素分泌细胞等，从而为帕金森、糖尿病等治疗提供新的治疗方式，是目前干细胞研究的热点之一 * 酶消化法 组织块贴壁法 原代培养6h后有大量细胞贴壁，贴壁细胞呈梭形、多角形 培养7天细胞呈长梭形，细胞平行或漩涡状排列。培养10天细胞可达80%融合。传代后的细胞形态无明显改变，排列更加整齐。 *