生物技术药期末复习.docVIP

生物技术制药 问心随心 第 第 PAGE \* MERGEFORMAT 1 页 共 NUMPAGES \* MERGEFORMAT 5 页 第一章 绪论 1.生物技术（见思考题） 2.基因工程：也称遗传工程，主要原理是应用人工方法将生物的遗传物质，通常是DNA分离出来，在体外进行切割、拼接和重组，然后将重组了的DNA导入某种宿主细胞或个体，从而改变它们的遗传品性；有时还使新的遗传信息在新的宿主细胞或个体中大量表达，以获得基因产物（多肽或蛋白质）。 3.细胞工程：指以细胞为基本单位，在体外条件下进行培养、繁殖，或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而达到改良生物品种和创造新品种，加速繁育动植物个体，或获得某种有用的物质的过程。（了解） 4.发酵工程： 是通过现代技术手段，利用微生物的特殊功能生产有用的物质，或直接将微生物应用于工业生产的一种技术体系。（了解） 5.酶工程：是利用酶或细胞所具有的特异催化功能，或对酶进行修饰改造，并借助生物反应器和工艺过程来生产人类所需产品的一项技术。（了解） 6.抗体工程：是利用细胞生物学或分子生物学手段在体外进行遗传学操作，改变抗体的遗传特性和生物学特性，以获得具有适合人们需要的、有特定生物学特性和功能的新抗体，或建立能稳定获得高质量和产量抗体的技术。 7.生物转化：也称生物催化biocatalysis是利用酶或有机体（细胞、细胞器）作为催化剂实现化学转化的过程，是生物体系的酶制剂对外源性底物进行结构性修饰所发生的化学反应。（了解） 8.生物技术药物biotechnological drug （见思考题） 9.生物技术药物的特性（思考题） 10.生物技术制药：是指利用基因工程、酶工程、发酵工程、细胞工程、蛋白质工程等生物技术，来研究、开发和生产用于预防、治疗和诊断疾病的药物的一门科学。 第二章 基因工程制药 DNA工具酶：限制性和旋内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶、逆转录酶、DNA修饰酶（多核苷酸激酶、碱性磷酸酶、末端脱氧核苷酰转移酶）（了解作用） 目的基因获取的方法：化学合成法、PCR法、cDNA文库法、基因组文库法等。 载体：根据目的不同，载体可分为克隆载体（用于外源DNA的扩增）和表达载体（用于外源目的基因的有效转录和翻译）。常见的载体有：质粒、λ噬菌体载体（黏粒）、真核病毒DNA、酵母质粒、M13噬菌体载体等。 克隆载体：复制起点（复制子）、筛选标记、多克隆位点、安全 表达载体：原核表达载体：复制子、筛选标记、多克隆位点、（强）启动子、终止子、RBS（或称SD序列）、起始密码子、终止密码子，最好还要有诱导表达的原件如操纵区域等。包括非融合型、融合型及分泌型表达载体。 真核表达载体：一般为穿梭载体，具有在大肠杆菌中复制的原件（复制子、原核筛选标记、多克隆位点等），还应该具有在真核细胞内复制表达的原件，启动子、增强子、转录终止信号、polyA加尾信号、复制起始序列、真核药物抗性基因等。包括不带病毒复制子和带病毒复制子两类。 目的基因的连接：DNA连接酶，黏性末端连接、平末端连接、黏性末端—平端连接、人工接头连接、同聚物加尾连接。 导入受体细胞：导入原核：转化（电转化、化学转化法如钙转）与转染。酵母：电转化、化学转化、原生质体融合。哺乳动物细胞：物理学方法(显微注射和电转化法)、化学方法 （磷酸钙沉淀法、DEAE-葡聚糖法、脂质体介导的基因转染）、生物法（逆转录病毒等病毒感染法）。 重组DNA筛选与鉴定：载体遗传标记法（alfa-互补、营养缺陷型、抗生素抗性筛选、噬菌斑筛选）、核酸分子杂交（菌落原位杂交、Southern-blot）、限制性内切酶谱法、DNA序列测定、PCR法、目的基因表达产物测定法。 作为遗传表达系统大肠杆菌，优点：操作简单、繁殖快和周期短；分子遗传学研究深入，目前是基因工程研究中采用最多的原核表达体系；大规模生产成本低、产量较高；下游纯化工艺简单，易于操控，生产效率高。缺点：分泌能力不足，真核蛋白质常形成不溶性的包含体，表达产物需经变性、复性才恢复活性；蛋白质不能糖基化；其内毒素很难除去；大肠杆菌中的表达不存在信号肽，产品多为胞内产物，提取困难（同思考题内的原核表达体系的优缺点）。 原核表达体系：表达真核基因只能选用cDNA，不能用基因组DNA；考虑密码子偏爱性；宿主菌的选择（与表达载体配套；外源蛋白表达的稳定性：低蛋白酶菌株；外源基因的结构：考虑密码子偏爱；目的蛋白的结构：二硫键的形成）。 原核表达体系表达形式：胞内表达（非融合表达[可能形成包涵体形式]、融合表达）、分泌表达（分泌到周质或胞外）。 真核表达体系优缺点：（见思考题）；包括酵母、昆虫、哺乳动物细胞表达系统