酵母遗传学方法实验指南 (美)A.亚当斯(AlisonAdams)等著刘子铎译.pdf

实 验 篇 实验一　　酵母细胞的观察 酵母细胞 的直径大约为 ，在光学显微镜下就可观察到它 的许 多重要特征 。在 实验室 中，最好定期在相差显微镜下观察酵母培养物 ，以掌握细胞 的生理状态 ，避免发 生污染 。在大多数现代酵母细胞生物学研究中，要对经过蛋 白特异抗体处理或特异结合 某些细胞器 的荧光染料处理后 ，才能对酵母细胞进行非常复杂 的镜检 。这个实验会提供 一些将光学显微镜用于酵母细胞检测的标准类型例子 。 生长培养物 的检测 生长特性 酿酒酵母（ ）细胞 以出芽方式生长 。出芽细胞称为母细胞 ， 新产生 的芽称为子细胞 。细胞生长 刚刚开 始 时 ，一个母细胞 上就会 出现一个 新芽 ，然 后 ，这个芽在整个细胞生长周期会不断生长直到细胞生长周期结束时才从母细胞上分离 下来 。由于一个酵母细胞 的全部生长都集 中于芽上 ，而且这种生长实 际上贯穿于整个细 胞周期 ，故通过观察芽的大小就可 以粗略的估计 出一个给定细胞处于细胞周期 的什么阶 段 。在 以指数增长 的酵母细胞培养物 中，大约有三分之一 的细胞没有芽 ，三分之一 的细 胞 出现小芽 ，还有三分之一 的细胞 出现大芽 。当生活细胞耗尽营养物后 ，它们就会像未 出芽细胞一样停止生长而滞 留在细胞周期 的某个阶段 。因此 ，掌握培养物生长状态 的一 种简单方法就是在显微镜下确定 出芽细胞 的频率 。注意 ，对一些菌株而言 ，尽管它们 已 经完成 了胞质分裂 ，但其母细胞和子细胞仍粘 附在一起 。在这种情况下 ，镜检前必须对 培养物进行振荡或超声波处理分离细胞 。许多种类 的突变子会停滞在细胞周期 的某个阶 段 ，从某种意义上讲 ，这也是它们 的一种表型特征 。例如 ：有丝分裂纺锤体缺 陷的细胞 会 以带有大芽 的形态停滞生长 ，通常从这 点就可 以判断细胞正处于细胞周期 的有丝分裂 阶段 。需要着重指 出的是 ，突变细胞 的停滞 点或最终表型在形态上与正常培养物 中的其 他任何细胞表型都不相 同。在上述有丝分裂突变子 中，母细胞和子细胞在停滞 点处继续 生长 ，结果两者均 比正常酵母细胞要大得多 。 单倍体与二倍体 的比较 酵母单倍体和二倍体细胞在形态学上十分相似，但也存在几点重要的差异。第一， 二倍体细胞 比单倍体细胞大。二倍体细胞胞质体积成倍增长，且细胞直径大约是单倍体 细胞的 倍 。当将单倍体与二倍体细胞并排放在一起进行比较时，就会很容易发现这 点差异。由于二倍体细胞 比较大，所 以它们 （在某些情况下甚至为四倍体细胞 ）经常用 来做荧光镜检，此时其较大的形态有助于分辨微小的细胞结构。第二，在形状上二倍体 细胞呈长形或卵圆形，而单倍体细胞通常近似圆形。第三，二倍体和单倍体细胞的出芽 方式不 同。酵母细胞在衰老前一般出芽 次，在母细胞表面 以定型的方式连续出芽。 单倍体细胞 以沿轴 向的方式出芽 ，每个芽与前一个芽紧密相连 。二倍体细胞 以极 向的方 式出芽，连续的芽可 出现在长形的母细胞 的任何一端 。用钙荧光素 （ ）处理 细胞后就可看 出细胞 的出芽方式 。钙荧光素是一种可 以结合到几丁质环上 的荧光化合 物，而几丁质环则在原来的芽上，这些几丁质环被称为芽痕，只要用钙荧光素处理单倍 体和二倍体细胞，就可 以看出芽痕是以轴 向还是 以极向方式增长。 交配细胞 酵母细胞有三种交配型： 和 ，这两种细胞能够相互交配形成第三种 交配型 细胞不能与 或 中的任何一种交配。一般情况 下，菌株 和 为单倍体 ，菌株 为二倍体 ，但有时也不一定 ，故 不能仅仅从染色体的倍性来判断细胞的交配型。在两种细胞开始交配的初期，双方互相 交换信息素，这使得细胞如同无芽细胞一样停滞在细胞周期的某个阶段，并诱导交配所 需蛋 白质的表达 。信息素也会使细胞在其表面产生一个突出物，这个突出物是进行细胞 融合所必需的。突出物通常指向它所要交配的细胞。具有交配突出物的细胞称为 “西蒙 斯细胞 ” ，因为这些突 出物与 世纪 年代的一个叫 的卡通人物十 分