中药安全性质量控制技术研究及应用实例.ppt

定量分析与方法学验证 生药中化学成分的定量分析是评价生药质量的重要手段。常用：分光光度法和色谱法。 用于生药定量分析的方法必须进行验证，以证明采用的含量测定符合相应的分析要求。验证内容：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。 （一）准确度 指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率表示。应在规定的范围内测试。 测定方法的准确度 用已知纯度的对照品做加样回收率测定，加入对照品的量要适当 对照品的加入量与供试品中已知含有量之和必须在标准曲线线性范围之内。 数据要求 同一浓度供试品溶液，6个测定结果或3不同浓度分别制备3份不同溶液。 一般中间浓度为所取供试品含量的100%水平， 80% 120% （二）精密度 一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 重复性（批内精密度） 系指同一分析人员在同一条件下对同一批样品至少制备6份以上或3个不同浓度分别制备3粉供试品溶液（9份），进行测定，计算相对标准偏差（RSD），RSD值一般要求不大于5。 中间精密度 系指在同一个实验室，在不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度。考察随机变动因素对精密度的影响。 3.重现性 系指在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。 （三）专属性 又称为 选择性。通常以不含被测成分的供试品作为空白样品进行试验来说明。 （四）检测限 供试品中被测成分能被检出的最低浓度或最小量，无需准备定量。 （五）定量限 指供试品中被测成分能被定量测定的最低量，反应分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。 （六）线性范围 （八）耐用性 系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。 二、定量技术 2. 高效液相色谱法（HPLC） 定义：高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 特点：高压、高效、高速。 尤其适合于高沸点、受热不稳定易分解的农药残留检测，如取代脲、氨基甲酸酯、黄酰脲类农药。 * 根据流动相和固定相的相对极性的不同可以将HPLC分为2种类型，即正相和反相色谱。在正相液相色谱中，流动相的极性小，通常为非极性的烷烃，固定相的极性大，通常为硅胶、纤维素等；在反相液相色谱中，流动相的极性大，通常为水一甲醇溶液、水一乙氰溶液等，固定相通常为键合的C18、C4等,极性较弱。反相液相色谱的应用相对广泛。 * 液相色谱的定性依据是保留时间的相对性，通常相对误差不能大于5％。定量参数常常采用峰高、峰面积、相对峰高、相对峰面积等。定量方法通常采用外标法、内标法和面积归一化法。外标法可分为外标一点法、标准曲线法等。 * l、外标一点法(直接比较法) 用与样品类似的浓度的标准溶液，等量进样，比较它们的峰高或峰面积。 Cx一未知样浓度 Cd－标样浓度 Ax－未知样峰面积 A－标样峰面积 * 2、外标法(工作曲线法) ? Cx一未知样浓度 Ax－未知样峰面积 Kx一直接斜率 （1）柱切换高效液相色谱技术 柱切换技术是指用阀来改变流动相走向和流动相系统，从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入到分析柱 的在线固相分离技术。 优点：①提高色谱系统的分辨率和选择性； ②使待测组分富集，提高灵敏度； ③在一个网络系统中实现多个分离目标； ④在线衍生化，提高灵敏度和重现性； ⑤在线净化样品，样本不需预处理或预处理大大简化，可直接进样分析。 （2）高效液相色谱柱后衍生荧光法 该方法主要是针对氨基甲酸酯类农药。 衍生化是药物分析中常用的一种分析手段。其原理是待测样品与衍生化试剂定量快速反应，并加入特定的功能的基团生成符合检测要求的衍生化物，通过检测生成衍生化物的量间接测定待测样品的量。 通过合适的化学反应,生成特殊衍生化物， 1. 改变待测物的色谱保留特性以改善分离度； 2. 改变待测物的检测特性，以增加其对检测器的响 应（例：紫外标记、荧光标记、电化学标记） ； 3. 生成稳定的衍生化物，改善待测物的不稳定性（ 例：-SH基团易氧化的问题可通过酰化来解决）。 化学衍生化的目的: HPLC化学衍生化分类