健步虎潜丸对体外成骨样细胞功能影响及防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究-中医骨伤科学专业论文.docx

万方数据 万方数据 中文摘要 【背景】 随着人口老龄化的进程，骨质疏松症的发生率逐年上升，严重影响老年人的 健康。虽化学药物制剂疗效确切，但是长期使用毒副作用大，且主要以抑制骨吸 收为主。应该寻求更加有效而安全的抗骨质疏松药物。大量研究表明，理想的抗 骨质疏松药物应该是既能够抑制骨吸收，又能够促进骨的形成，且副作用少，价 格便宜。“健步虎潜丸”出自《伤科补要》卷三，其疗效已经为长期临床所证实。 【目的】 研究健步虎潜丸对体外成骨样细胞增殖及功能影响,并进一步研究其对去卵 巢大鼠骨质疏松症的预防作用。本研究拟为开发新型有效的防治骨质疏松症药物 奠定基础,促进防治骨质疏松症复方中药的现代化和国际化。 【材料与方法】 1. 24 只成年雌性 SD 大鼠随机分为健步虎潜丸组低剂量组、中剂量组、高 剂量组及生理盐水组，并分别以含生药 1.5 g/kg 、3 g/ kg、6 g/ kg 的健步 虎潜丸及等体积的生理盐水灌胃，每天 2 次，连续给药 1 周。以各组血清分别处 理成骨样细胞 24、48、72 小时，观察细胞形态学，同时对细胞增殖能力进行测 定。 2. 24 只成雌性 SD 大鼠随机分为健步虎潜丸组低剂量组、中剂量组、高剂 量组及生理盐水组，并分别以含生药 1.5 g/ kg 、3 g/ kg、6 g/ kg 的健步虎 潜丸及等体积的生理盐水灌胃，每天 2 次，连续给药 1 周。各组血清分别处理成 骨样细胞 24、48、72 小时，对碱性磷酸酶染色的细胞进行形态学观察，同时对 碱性磷酸酶活性进行测定。 3.70 只成年雌性 SD 去卵巢大鼠随机分为健步虎潜丸组低剂量组、中剂量组、 高剂量组、生理盐水组及阿仑磷酸钠组，并分别以含生药 1.5 g/ kg 、3 g/ kg、 6 g/ kg 的健步虎潜丸、等体积的生理盐水灌胃、1mg/ kg 阿仑膦酸钠灌胃，健 步虎潜丸各组及生理盐水组每天灌胃 2 次，阿仑磷酸钠组每天灌胃 1 次。16 周 3 后进行血清酶学、影象学、骨密度、骨显微形态计量学、生物力学及组织学的检 测。 【结果】 1．健步虎潜丸含药血清对 ROS17/2.8 成骨样细胞形态影响：从 24 小时开始 健步虎潜丸低剂量组、健步虎潜丸中剂量组及健步虎潜丸高剂量组的细胞密度高 于对照组,核分裂相多见,细胞重叠生长,分泌物多,基质堆积明显, 健步虎潜丸高 剂量组细胞改变尤为显著。 2．健步虎潜丸含药血清对 ROS17/2.8 成骨样细胞增殖能力：实验各组内的 MTT 值 24h、48h、72h 逐渐增加，结果具有统计学意义。24h、48h、72h 各干预 组较对照组 MTT 值明显增加，具有有显著性差异。24h 时健步虎潜丸中、高剂量 组较低剂量组 MTT 值明显增加，具有有显著性差异；24h 时虎潜丸中、高剂量组 MTT 值没有显著性差异。48h、72h 时各干预组组间比较，随干预剂量增加，MTT 值增加，结果具有统计学差异。 3．ROS17/2.8 成骨样细胞的碱性磷酸酶染色：24h、48h 时，各干预组及对 照组碱性均磷酸酶染色阳性，但各浓度干预组细胞内的碱性磷酸酶染色肉眼未见 明显差异。72h 时，各不同浓度干预组及正常组其 ROS17/2.8 成骨样细胞内碱性 均为磷酸酶染色阳性,对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组碱性磷酸酶着色 逐渐加深。 4．健步虎潜丸含药血清对 ROS17/2.8 成骨样细胞碱性磷酸酶活性：随着时 间增加，实验各组内的 MTT 值碱性磷酸酶活性值逐渐增加，结果具有统计学意义； 24h、48h、72h 各干预组较对照组 MTT 值明显增加，具有有显著性差异。24h、48h、 72h 时各干预组组间比较，随干预剂量增加，碱性磷酸酶活性值逐渐增加，结果 具有统计学差异。 5.大鼠血清骨钙素：与卵巢切除对照组相比，健步虎潜丸各剂量组骨钙素水 平显著升高，结果具有统计学差异，阿仑膦酸钠组骨钙素水平水平显著降低，结 果具有统计学差异。健步虎潜丸各剂量组随剂量增加，骨钙素水平有升高的趋势， 但结果无统计学差异。和阿仑膦酸钠组相比，各剂量组骨钙素水平显著升高，结 果具有统计学差异。 4 6.酒石酸酸性磷酸酶 5b（TRAP-5b）：与卵巢切除对照组相比，各药物治疗 组酒石酸酸性磷酸酶 5b 水平显著降低，结果具有统计学差异。健步虎潜丸各剂 量组随剂量增加，酒石酸酸性磷酸酶 5b 有降低的趋势，但结果无统计学差异。 和阿仑膦酸钠组相比，健步虎潜丸各剂量组的酒石酸酸性磷酸酶 5b 无统计学差 异。 7.影象学检查：对照组其骨皮质薄，边缘模糊，松质骨的透光度较高，各药 物干预组较对照组相比股骨的骨皮质更厚，松质骨透光度更低。 8.骨密度：与卵巢切除对照组相比，各药物干预组股骨和腰椎骨密度显著增 加，结果具有统计学