酶分离纯化的评价.pptVIP

第二章 酶的生产与分离纯化;主要内容;4 酶分离、纯化的评价;基本概念1;;比活力 (Specific activity) ：比活力是指单位蛋白质 (毫克蛋白质或毫克蛋白氮) 所含有的酶活力 (单位/毫克蛋白) 。 比活力是酶纯度指标，比活力愈高表示酶愈纯，即表示单位蛋白质中酶催化反应的能力愈大。 但是，比活力仍然是个相对酶纯度指标。要了解酶的实际纯度，尚需采用电泳等测定方法。; ;酶纯化评价实例 ;5 酶的剂型与保存;5.1 液体酶制剂 ;5.2 固体粗酶制剂 ;5.3 纯酶制剂 ;酶的保存方法;6 酶的分子结构与催化功能;6.1 酶分子组成;2. 辅基或辅酶 仅有少部分酶是由单一蛋白质所组成，而大部分酶 则为复合蛋白质，或称全酶，是由蛋白质部分(酶蛋 白)和非蛋白质部分所组成，即酶蛋白本身无活性， 需要在辅因子(Cofactor)存在下才有活性。 有机辅因子可依其与酶蛋白结合的程度分为辅酶 (Prosthetic enzyme)和辅基(Prosthetic group)。 ;（1）铁卟啉;（2）黄素核苷酸 (FMN和FAD等);在酶的催化作用下，FMN和FAD的功能是传递氢(传递质子和电子2H→2H++2e)，亦称氢载体而自成氧化－还原体系，反应主要表现在6,7－二甲基异咯嗪基团中的第1位及第10位N原子的脱氢与加氢。其反应式如图3－3。;（3）烟酰胺核苷酸(NAD及NADP);NAD及NADP在脱氢酶催化过程中参予传递氢的作用，其氧化还原作用体现在烟酰胺环的第4位碳原子上的加氢或脱氢。在中性环境中其氧化还原的反应式如图3－5。;（4）硫辛酸(6，8 － 二硫辛酸) ;（5）泛醌 (辅酶Q，简写为UQ) ;（6）辅酶A (CoA) ;辅酶A也可写为CoASH。CoASH通过其巯基 (－SH) 的受酰 基与脱酰基，参与转酰基作用，其反应式为：;磷酸腺苷及其它核苷酸类 在代谢过程中起着重要作用，它们是许多转磷酸基酶 (如磷酸激酶) 的辅酶。 焦磷酸硫胺素(TPP) 　　　 α－酮酸脱羧酶和糖类的转酮酶(催化自酮糖上转2Ｃ单位至醛糖上去的酶) 的辅酶。 磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺 氨基酸的转氨酶、消旋酶和脱羧酶的辅酶，磷酸吡哆胺与转氨作用有关。 生物素　(维生素H) 羧化酶的辅基，属于维生素Ｂ族，它与酶蛋白结合后可催化CO2的掺入与 转移。 四氢叶酸　(辅酶F，THFA) 甲酰基、亚甲基等一碳基???载体，能参与一碳化合物的代谢。 金属 　　　 除卟啉环含铁或铜离子外，还有许多酶尚含有铜、镁、锌、钴等金属离子 作为辅基，为酶的催化作用中不可缺少的组分。;基本概念 2;酶分子的修饰方法;酶原：;;;;;;例如天冬氨酸激酶 (AK) 有三种同工酶：AK1、AK2、AK3，磷酸葡萄糖变位酶有50种以上的同工酶。乳酸脱氢酶有5种同工酶：LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5。;;本章重点： ;谢 谢 ！