第七章 化学毒物的致畸作用ppt课件.ppt

* 环磷酰胺:该品为最常用的烷化剂类抗肿瘤药 * 由于大鼠的阴栓脱落较早，使用一般阴栓检查法漏检率很高，因此多采用阴道精子检查法 大鼠合笼用不锈钢笼子即可,因为那个笼子下面是镂空的,阴栓可以掉到托盘里 * 由于母鼠有食畸形胎仔的习性 故自然分娩前处死 * 口腔与鼻腔间有缺裂存在 * 常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，使组织或细胞分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。 大鼠和小鼠一般可自受孕后第5天开始给予受试物，每日一次，持续到第15天。 接触受试物的方式与途径应与人体实际接触情况一致，一般多经口给予。也可采用灌胃方式，以保证剂量准确，效果较混入饲料喂给为好。在特殊情况下，也可采用腹腔注射法，效果与经口近似。 试验期间每2～3天称取母鼠体重。一方面可根据体重增长，随时调整给予受试物的剂量，同时也可观察受孕动物的妊娠情况和胚胎发育情况。受孕动物的体重如持续增长，则表示妊娠过程及胚胎发育正常；如体重停止增长或下降，可能由于受试物的毒性作用或母体的其它原因，引起胚胎死亡或流产。 4．胎仔检查 自然分娩前1～2日将受孕动物处死，剖腹取出子宫及活产胎仔，并另行记录死胎及吸收胎。一般大鼠在受孕后第19～20天，小鼠第18～19天，家兔在第29天。 活产胎仔取出后，先检查性别，逐只称重，并按窝计算平均体重，然后由下列几方面进行畸形检查： ①外观畸形肉眼检查，例如露脑； ②肉眼检查内脏及软组织畸形，例如腭裂； ③骨骼畸形检查，例如颅顶骨缺损，分叉肋等。畸形检查只限活产胎仔。 露脑 颅骨部分或完全缺失，脑组织部分或全部暴露。 腭裂 腭：为口腔上壁，前面部分，称“硬腭”；后面部分是结缔组织和肌肉构成的，称“软腭”。 腭裂：口腔与鼻腔间有缺裂存在。 通常腭裂可分为四种类型： ①软腭裂，不并发唇裂； ②软硬腭裂，常并发单侧不完全性唇裂； ③单侧完全腭裂，常并发单侧完全性唇裂； ④双侧完全性腭裂，常与双侧完全性唇裂并存。 在临床上以③种腭裂最为多见，④种最少见。 软腭裂 单侧完全性腭裂（左侧），合并左侧完全性唇裂 双侧完全性腭裂 软硬腭裂，常并发单侧不完全性唇裂 以上检查只能检出结构与形态异常的畸形，不能检出可能发生的生化功能或神经行为缺陷。因此有人主张将试验雌鼠保留1/4左右，待其自然分娩，并将出生幼仔饲养观察，至少到断奶，以便检查可能存在的先天缺陷和生理功能异常。 5．结果评定 在致畸试验结果评定时，主要计算畸胎总数和畸形总数。 计算畸胎总数时，每一活产幼仔出现一种或一种以上畸形均作为一个畸胎。 计算畸形总数时，在同一幼仔每出现一种畸形，即作为一个畸形；如出现二种或二个畸形，则作为二个畸形计，并依此类推。计算时还要对剂量反应关系加以分析。更重要的是按下列指标将各剂量组与对照组结果进行比较。 （1）活产幼仔平均畸形出现数：即根据出现的畸形总数，计算每个活产幼仔出现的畸形平均数。对较为重要的畸形，还可分别单独进行计数。 ????????????????????????????????????????????? 畸形总数 活产幼仔平均畸形出现数= —————?????????????????????活产幼仔总数 ????????? （2）畸胎出现率：即作为畸胎的幼仔在活产幼仔总数中所占的百分率。 ??????????????出现畸形的胎仔总数 畸胎出现率= ———————————× 100% ?????????????????活产胎仔总数 （3）母体畸胎出现率：即出现畸形胎仔的母体在妊娠母体总数中所占的百分率。计算出现畸形母体数时，同一母体无论出现多少畸形胎仔或多少种畸形，一律按一个出现畸胎的母体计算。 ?????????????????? 出现畸胎的母体数 母体畸胎出现率= ———————————× 100% ??????????????????????妊娠母体数 6．致畸物以及发育毒性作用物危险度评定 （1）欧共体（EEC）和经济合作与发展组织（OECD）建议的致畸物分级标准。主要根据动物试验和人群调查资料，具体分级标准： 1级，已确定人类母体接触后可引起子代先天性缺陷； 2A级，对动物肯定致畸，但对人类致畸作用尚未确定因果关系； 2B级，动物试验结果肯定致畸，但无人类致畸资料； 3级，尚无结论性肯定致畸证据或资料不足； 4级，动物试验阴性，人群中调查结果未发现致畸。 （2）致畸指数：母体LD50与胎仔最小致畸作用剂量之比，即母体LD50／胎仔最小致畸作用剂量。这一比值愈大，致畸作用愈强，一般认为比值10以下者，不具致畸作用，10～100具致畸作用，100以上致畸作用强烈。 （3）相对致畸指数（RTI）：成年动物最小致死剂量（L